胰蛋白酶活力测定实验报告

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划胰蛋白酶活力测定实验报告　　实验报告　　MTT实验　　一、实验原理　　MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝

2、紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm。波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的

3、业务技能及个人素质的培训计划　　缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。MTT溶液的配制方法：通常，此法中的MTT浓度为5mg/ml。因此，可以称取克，溶于100mL的磷酸缓冲液或无酚红的培养基中，用μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。　　需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细

4、胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT吸光度最好在范围内。MTT一般最好现用现配，过滤后放4℃，避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多，尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。　　MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时　　间较短，

5、或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉。　　配制MTT时用PBS溶解。　　NaCl8g＋KCl＋Na2HPO4＋KH2PO4调pH，定容1L。　　二、实验目的目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　1.利用胶束测试细胞毒性(MTT法)，选择的细胞为：HeLa细胞、L929细胞和HepG2细胞，测试48h内不同聚合物胶束浓度下细胞的存活率

6、。　　2.制备含有负载不同浓度的DOX药物载体，利用MTT法，选择的细胞为：HeLa细胞、L929细胞和HepG2细胞，测试48h内负载不同浓度DOX的药物载体细胞的存活率。　　3.对于负载药物的DOX药物载体，利用CLSM(共聚焦激光扫描显微镜)，观察在h,1h,2h,4h,8h细胞中的成像问题。　　三、实验方法目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的

7、培训计划　　将状态良好的细胞消化，用培养液稀释至3×104cells/mL细胞密度，吹匀后于96孔板中每孔加入细胞悬液100μL，置培养箱中孵育24h使其贴壁。待细胞贴壁后加药。本实验中药物溶液与胶束制剂的配制和稀释均用培养液，并用μm滤膜无菌过滤。受试溶液每孔加入100μL，每个浓度3个平行孔；对照组，即不加待测药液，单一补加100μL培养液,置培养箱中和细胞共同畔育。于加药后48、72和96h，将96孔板取出，每孔加入2mg/mLMTT溶液50μL，置培养箱中鮮育4h后甩板，将96孔板倒扣于滤纸上充分吸干残留液体后，每孔加入200μLD

8、MSO于振荡器上振荡10min以溶解蓝紫色结晶物。设定A1孔(只含有200μLDMSO)为调零孔。使用酶标仪在三、配置不同浓度的胶束以及负载不同浓度DOX的药物载体，使终浓度分别