血液中转氨酶活力的测定实验报告

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划血液中转氨酶活力的测定实验报告　　实验二转氨酶活性的测定　　一．研究背景及目的　　转氨酶是生物体内重要的一类酶。转氨酶催化α-氨基酸的氨基与α-酮酸的酮基之间的相互转化而生成一种新的氨基酸与一种的新的酮酸，这种作用被称为转氨基作用[1]。转氨酶种类很多，体内除了赖氨酸、苏氨酸外，其余α-氨基酸都可参加转氨基作用并各有其特异的转氨酶。其中以谷丙转氨酶和谷草转氨酶最为重要。GPT与GOT活

2、性的测定在临床上有着重要应用，可作为一些疾病诊断的指标。GPT催化的是谷氨酸与丙酮酸之间的转氨作用，GOT催化的是谷氨酸与草酰乙酸之间的转氨作用，草酰乙酸在柠檬酸苯胺溶液中可以转变为丙酮酸与二氧化碳。由于都有丙酮酸的生成，所以可以通过实验测定一定时间内丙酮酸的生成量而计算这两种转氨酶的活性。本实验以动物的新鲜肝脏和血清为材料，分别测定其中的GTP的活性，以此来研究该转氨酶活性的测定方法。　　二．原理目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，

3、并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　由于动物肝脏和血清中的转氨酶活性较高，易于测得，且动物或人的转氨酶活性的测定应用广泛、技术成熟，因此本试验选取家兔的新鲜肝脏和血清为实验材料，对其中的一种重要转氨酶——GTP的活性进行测定。转氨酶活性测定的历史沿革建立了金氏法、穆氏法及赖氏法等较成熟的基本方法，本实验采用的是金氏法。该方法对转氨酶活力的定义是：血清在37℃，条件下，与底物作用60min后

4、，每生成1μM丙酮酸为一个转氨酶活性单位。丙酮酸含量的测定运用的是比色法。丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应，生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，所以通过测定溶液在520nm下的光吸收值并与标准溶液比色便可计算出丙酮酸的含量，丙酮酸的含量对应于一定的转氨酶活力单位。　　三．材料、试剂与仪器材料：　　新鲜家兔肝脏和血清试剂[1]：　　①磷酸盐缓冲液甲液：1/15mol/L磷酸氢二钠溶液乙液：1/15mol/L磷酸氢二钾溶液　　取甲液825ml，乙液175ml，混合，测得pH为即可。　　②GT

5、P基质液　　称取α-酮戊二酸及DL-丙氨酸，溶于的磷酸盐缓冲液20ml中，再加缓冲液70ml，并移入100ml容量瓶中，加1mol/L的氢氧化钠溶液，校正pH至，再以的磷酸盐缓冲液定容。贮存于冰箱中备用，可保存一周时间。③2,4-硝基苯肼溶液　　称取2,4二硝基苯肼20mg，先溶于10ml浓盐酸中，再以蒸馏水稀释至100ml，棕色试剂瓶内保存。④丙酮酸标准液目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新

6、战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　精确称取丙酮酸钠22mg。溶解后转入100ml容量瓶中，用的磷酸盐缓冲液定容即可。⑤柠檬酸苯胺溶液　　取柠檬酸50g溶于50ml蒸馏水中，再加苯胺充分混合即可，低温出现结晶时，可置于37℃水浴中溶解后应用。⑥氢氧化钠溶液仪器：　　DK-S24型电热恒温水浴锅TPL-4OB低温台式离心机722光栅分光光度计　　大龙系列加样器及吸头JP-100架盘药物天平配平天平　　刻度试管，离心管，小烧杯，匀浆器

7、，洗瓶，冰浴　　四．操作步骤　　1．取健康家兔，处死。心脏采血，分装至离心管，4000转低　　温离心15min，取上清液冰浴待用。取肝脏，生理盐水冲洗沥干，取1g匀浆，用磷酸盐缓冲液定容至10ml，4000转低温离心15min，取上清液，冰浴，记为肝脏研磨液1。取2ml肝脏研磨液1，用磷酸盐缓冲液定容至4ml，冰浴，记为肝脏研磨液2。　　2．取6支试管，编号，按下表操作[1]：　　再取18支试管，分为三组，每组6支，分别用于测定血清、肝脏研磨液1、肝脏研磨液2的GPT活性，　　6支试管中3支作为

8、测定管，另外3支作为对照管。　　五．数据整理　　2.GPT活性测定目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　血清中GPT活性的测定　　肝脏研磨液1中GPT　　活性的测定　　六．结果计算与分析　　根据标准曲线方程　　y=+　　计算各三种样品光吸收值对应的酶以上结果显示：血清中GPT活性较高，而肝脏中的