细胞核的分离与鉴定实验报告

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划细胞核的分离与鉴定实验报告　　医学细胞生物学设计型实验设计报告　　姓名：李飘班级：K—10班学号：10XX1004评分　　【实验项目】：动物细胞细胞核的分离与鉴定　　【实验原理】：核体的制备核体是指含有少量细胞质并由质膜包裹的　　细胞核。因为在实际中我们不可能100%的得到细胞核，因此,我们只能制备含有少量细胞质的核体，核体的制备方法主要有吸出法和原生质体破裂法等。在本实验中我们采用排

2、除法来制备核体。排除法制备核体是通过细胞松弛素和高速离心的作用使细胞核排出，然后从离心管底部沉淀中收集获得核体。　　细胞核的鉴定因为细胞核中主要含DNA，是碱性蛋白。因此将分离出的核体经三氯醋酸处理,抽提掉核酸后，用碱性固绿溶液染色，可以使细胞核内的碱性蛋白显示出来。　　【实验步骤】：　　1．细胞培养：将欲分离微核体和细胞质的动物接种于脱核塑料圆板上，使适宜的培养基中于37℃的条件下培养，使细胞固定在脱核塑料圆板上，脱核塑料圆板的直径应稍小于离心管的直径，使用前先用水洗干净再经过乙醇杀菌处理。目

3、的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　2．秋水仙碱处理：细胞培养一段时间以后，加入/ml的秋水仙碱，处理细胞48～60h滤纸，使细胞形成多个大小不同的核体。　　3．细胞松弛素处理：在离心管内加入5ml预热至37℃的细胞松弛素B溶液将固定有动物细胞的圆板面朝下放入离心管内，固定圆板位置后，再加入10

4、ml37℃的CB溶液。　　4．离心：在1000～15000r/min核体从细胞排出。　　5．收集核体：由于核体的贴附力弱，可以从离心管底部的沉淀中收集。6．固定：将收集的核体涂于玻片上制成涂片，滴加15%乙醇于涂片上，固定5min，室温晾干。　　7．三氯醋酸处理：将已固定的血涂片浸在90℃的三氯醋酸溶液中处理20min，细流水反复冲洗玻片上的三氯醋酸直至冲尽。用滤纸吸于玻片上多余水分晾干。　　8．染色：将制作好的涂片放入%碱性固绿染液中染色10～15min，细流水冲去多余染液，晾干，镜检。　　【

5、注意事项】：　　1．在离心管内加入的5ml细胞核松弛素B溶液要预热到37℃，因为只有这样才接近动物的最佳体温37℃。　　2．涂片在用三氯醋酸处理时，时间不宜过长或过短，过长会使核膜裂解，过短使抽提的核酸不够。　　3．在染色时，时间一定要足够，否则染色不完全，得不到理想的实验结果。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及

6、个人素质的培训计划　　4．因去掉胞质的核体贴附能力弱，因注意在固定、三氯醋酸处理、染色时、尽量避免胞核的脱落。　　【预期结果】：经碱性固绿染色的核体涂片被染成绿色，说明这是碱性　　蛋白，即细胞核。　　医学细胞生物学设计型实验设计报告　　班级10级k-7班评分　　实验项目：细胞核的分离与鉴定　　实验原理：1、细胞内各种结构的比重和大小不同，在同一离心场内其沉降速度也不同。所以，用差速离心法可将细胞内各种细胞器及组分分级分离出来。差速离心法也是用来研究亚细胞成分的化学组成，理化特性及其功能的主要手段

7、。　　2、分离细胞核最常用的方法是将组织制成匀浆，在特定的条件下进行离心分离，然后分析鉴定。　　3、匀浆是指在低温条件下，将组织放入匀浆器，加入等渗匀浆介质进行研磨，破碎细胞，使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆液。　　实验步骤：1、处死：断头处死小白鼠，手提尾部使其学业尽量流出。　　2、取材：迅速开腹取肝，在盛有生理盐水的小烧杯中反复洗涤，称取湿重约为1g的肝组织放在烧杯中。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全

8、感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　3、匀浆：加油8ml预冷的/L蔗糖/L绿化高永夜于烧杯中，尽量剪碎肝组织，将剪碎的刚组织倒入玻璃匀浆器，是匀浆器下端侵入盛有冰块的器皿。左手握持匀浆器，右手将匀浆捣杆垂直插入管中匀浆，直至看不到明显的组织块。　　4、过滤：用8层纱布　　过滤匀浆液于离心管中。　　5、离心：在天平上平衡每对离心管，2500r/min离心15min，取上清液于另一离心管中。　　6、涂片：取上清液制一