细胞核分离及鉴定

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1、医学细胞生物学设计型实验设计报告姓名吴远依班级医检12-1班学号1210850116评分实验项目：细胞核的分离与鉴定实验原理：1.细胞是由膜包围着含细胞核、线粒体、核糖体、内质网等结构及其细胞质构成。细胞内的这些结构的比重和大小等不相同，同一离心场内其沉降速度也不同。根据这一原理，常用不同介质和转速离心，将细胞各组分分级分离出来，即细胞的分级分离。2.常用的分级分离法有差速离心法和密度梯度离心法。差速离心法是指由低速到告诉逐级沉降分离，当离心力低、离心时间短时，较大的颗粒如细胞核先沉淀到管底。密度梯度离心是用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通

2、过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。本实验只需把细胞核沉降下来即可，因此不需要使用密度梯度离心法。然而，差速离心法的使用，必须要把细胞裂解使细胞器暴露出来。3.细胞核的结构由核膜、染色质、核仁和核基质构成。本实验采用鸡血细胞，因为鸡血细胞容易吸水胀破。加入蒸馏水是低渗环境，所以可以使得细胞膜低渗破裂，而由于核膜的组成（蛋白质及脂类的种类、数量、比例）与细胞膜有差别，因此核膜在低渗环境下破裂需要更长的时间，所以控制相对较短的时间，可使细胞核暴露出来。实验步骤：一、原料的准备取新鲜鸡血5ml加入已经配置好的5g/L的柠檬酸钠抗凝剂5ml置于烧杯中（柠檬酸钠抗凝剂的制备0.1g加入20ml的蒸馏

3、水）。二、裂解细胞向烧杯中加入5ml蒸馏水，用玻璃棒沿着同一个方向搅拌1min。离心取已经处理过的鸡血细胞5ml置于离心管中，以2000r/min离心5min。涂片取上清液制成一张涂片，标记为①。将原离心管中剩余上清液吹打沉淀成悬液（如果上清液多，可以倒掉些），标志为②。染色分别在涂片①②上滴加甲苯胺蓝染液，染色5~7min。洗涤冲去染液，晾干显微镜下观察注意事项：1.取到鸡血时不能过较长时间才加入抗凝剂；2.裂解鸡血细胞时，一定要严格控制时间，否则时间过长细胞核也会裂解；3.制片过程中要把握涂片的力度，以免涂片过厚；洗涤切片时，时间不要太长，以免把染料全部冲去，观察不到细胞核。预期结果：低倍

4、镜下找到标本，换高倍镜，可以看见鸡血细胞的细胞核已经游离，被染成蓝紫色，圆形，细胞核中可见被染成深蓝色的核仁。教师：日期：实验仪器、设备、器具表姓名吴远依（组长）班级医检12-1班学号1210850116实验项目：细胞核的分离与鉴定名称规格、型号数量说明烧杯50ml2个玻璃棒1条离心管1支载玻片2张光学显微镜1台普通离心机1台可调式移液器100—1000ul1个移液器吸头100—1000ul3个实验试剂表姓名吴远依（组长）班级医检12-1班学号1210850116实验项目：细胞核的分离与鉴定名称规格用量说明新鲜鸡血5ml柠檬酸钠抗凝剂0.1g蒸馏水25ml甲苯胺蓝染液按照实验室的规格1-2滴