生物技术综合实验报告

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划生物技术综合实验报告　　生物技术综合实验　　甘薯γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因的克隆和原核表达　　学生：学号：　　同实验者：　　　　谷胱甘肽(glutathione,GSH)GSH具有多种重要生理功能,抗自由基和抗氧化应激作用,保护细胞膜的完整性等。γ-GCS是植物细胞中GSH生物合成的限速酶,可以调控GSH的生物合成量。GSH在生物体抵御冷害、干旱、重金属、真菌等胁迫过程中起着重要作用,说明γ-GCS也与植物抗逆过程密切相关。　　实验一甘薯叶

2、片RNA提取　　一、实验目的　　1.了解真核生物RNA提取的原理；　　2.掌握Trizol提取的方法和步骤。　　二、实验原理目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　Trizol试剂是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速抽提总RNA的试剂，在匀浆和裂解过程中，能在破碎细胞、降解细胞其它成分的同时保持RNA的完整性。TRIzol的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，

3、使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase。%的8－羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强抑制作用。异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。在氯仿抽提、离心分离后，RNA处于水相中，将水相转管后用异丙醇沉淀RNA。用这种方法得到的总RNA中蛋白质和DNA污染很少。　　三、实验材料

4、　　1.材料　　甘薯叶片，品种为徐薯18　　2.试剂　　①无RNA酶灭菌水：加入%的DEPC，处理过夜后高压灭菌；　　②Trizol试剂；　　③氯仿；　　④异丙醇、75％乙醇；　　⑤TBE缓冲液；　　⑥上样缓冲液目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　3.仪器　　高压灭菌锅、微量移液器、台式离心机、超净工作台、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、塑料离心管、枪头和EP管架　

5、　四、实验方法　　1.将叶片取出放入研钵中，加入适量液氮，迅速研磨成粉末，每50-100mg植物叶片加入1mLTrizol试剂，室温放置5min，使样品充分裂解；　　2.每1mLTrizol试剂加入200μL氯仿，用手剧烈振荡混匀后室温放置3-5min使其自然分相；　　3.4℃12,000rpm离心15min，吸取上层水相转移到新管中；在上清中加入等体积冰冷的异丙醇，室温放置15min；　　4.4℃12,000rpm离心10min，弃上清，RNA沉淀于管底；　　5.RNA沉淀中加入1mL75%的乙醇，温和震荡离心管，悬浮沉淀；4℃8,000rpm离心2min，弃上清

6、；　　6.室温放置10min晾干沉淀；　　7.沉淀中加入20μLRNase-freeddH2O，轻弹管壁，以充分溶解RNA，-70℃保存；　　8.用1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测，用EB染色并照相。　　五、实验结果　　1.RNA提取结果目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　依照Trizol试剂盒方法，提出的RNA较少，此部分未以图或数据显示。　　2.RNA后电泳结果　

7、　如图1.其中9a为本组实验结果。由图可知RNA条带非常模糊，拖尾现象严重，几乎无法分清具体条带，亮度较大。点样孔附近的红色部分为杂质，在提取过程中并未很好除去。　　图1.RNA提取跑胶结果。其中1泳道为样品Marker，9a泳道为本小组RNA样品。与标准对照可见条带模糊，拖尾现象严重。　　六、分析与讨论　　1.RNA的提取　　产量并不多，可能是因裂解样品不充分或RNA沉淀未完全溶解所致。在实验过程中，由于对操作时间的掌握不熟练、操作技巧不完善，留上清与弃上清时令RNA损失了部分，使最终RNA产量不理想。　　2.RNA电泳结果　　有EB存在时，电泳后28SrRN