植物组织中dna的提取和纯度鉴定实验报告

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划植物组织中dna的提取和纯度鉴定实验报告　　实验十二植物中DNA的提取及鉴定　　一.实验目的　　1.学习掌握从植物中提取DNA的方法　　2.学习掌握从植物中分离核酸的原理和方法　　二.实验原理　　Ⅰ植物基因组DNA的提取　　植物组织中绝大部分是核DNA，它和组蛋白、非组蛋白结合在一起，以核蛋白的形式存在于细胞核内。CTAB(十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammoniumbromide，简称CTAB)：是一种阳离子去污剂，可溶

2、解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中(0.7mol/LNaCl)是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度(/LNaCl)时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中。　　在DNA提取过程中必须始终注意以下几个关键问题：　　DNA的二级结构和双链易受多种因素的影响引起双链解开，即“变性”，因此抽提时避免使用变性的条件。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的

3、安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　抑制内外源DNase的活力。DNase就象一把刀，它能把大分子的DNA切成碎片，所以要加以杜绝，现可以通过多种途径来做到这一点：a、低温操作；b、调节pH，使偏碱；c、抽提液中加表面活性剂；d、加螯合剂除去酶的铺助因子，使酶活性丧失。　　防止化学降解。如过酸或过碱以及其它化学因素，会使DNA降解，一般综合考虑，取左右为宜。　　防止物理因素降解。如温度太高或机械张力剪切等，DNA分子特别大，其分子量可达1012道尔顿，极易被机械张力拉断，甚至

4、在细管中稍急一些的流动也会使DNA断裂，所以在抽提过程中要特别注意这一点，操作过程要尽量简便、温和、减少搅拌次数，也不要剧烈摇动。　　植物的次生代谢物对核酸提取有干扰作用。因此，一般尽可能选幼嫩的、代谢旺盛的新生组织作为提取DNA的材料，这是因幼嫩的新生组织次生代谢物较少，DNA含量高，且易于破碎，植物材料最好是新鲜的。　　分离提取植物DNA的方法很多，本实验采用CTAB法提取DNA并通过紫外吸收法和电泳鉴定。　　三.材料与方法　　取200mg样品(在液氮中研磨成粉末状)放入离心管中，加入600μLDNA提取液，颠倒混匀5-6次。65℃保温35分钟以上，其间颠倒

5、混匀一次。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　再加等体积的氯仿异戊醇(24：1)溶液轻轻摇晃30秒，在4℃下10000rpm/分钟离心10分钟后，取吸上清液(450μL)　　再加两倍体积的预冷异丙醇，混匀静止10分钟以上，在4℃下10000rpm/分钟离心10分钟后，弃上清。　　用600μL70%乙醇洗涤沉淀，重复一次，在室温下倒置晾干。　　沉淀用TE溶液溶解

6、DNA，再加入RNase至终浓度50μg/mL，在37℃下保温半小时，将DNA样品放入冰箱保存。　　嘌呤碱基的鉴定　　取1试管，取/LAgNO3液(逐滴加入氨水至沉淀消失)，然后加入1ml水解液旋转片刻。观察有无白色沉淀产生　　磷酸的检测　　取1ml水解液加入8滴浓硝酸和1ml钼酸铵置沸水浴中加热8min，观察颜色变化及沉淀状况.　　脱氧核糖捡测　　取1ml水解液加入等体积的二苯胺试剂，于沸水浴中加热8min,观察颜色变化。　　四.结果与分析　　第一支试管出现白色沉淀，　　第二支试管出现棕色沉淀，　　第三支试管出现浅蓝色。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了

7、解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　分析：由于嘌呤碱基存在，与银离子结合生成白色沉淀；磷酸与在浓硝酸作用下，与钼酸铵反应变为黄色，硝酸氧化使颜色加深变为棕色；脱氧核糖与二苯胺反应，溶液变为蓝色.　　五.讨论与结论　　实验结果与前人所做相同，本次实验成功.　　六.思考题　　1、核酸分离时为什么要除去小分子物质和脂类物质？本实验是怎样除掉的？　　答：分离纯化的目的就是得到尽可能纯的东西。用于分子生物学目

8、的的核酸中如果混有小分子