高等植物DNA的提取和纯度鉴定.doc

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1、爲菁植的羽彳的提取牝純庚鉴底总转報告药学院08级本科一班周止昌3008213029阙梦3008213030报告内容•预实验情况•实验屮问题•同学的意见•我们的总结一、预实验情况（按实验日期排列）9.10实验情况此次是我们第一次正式实验先前培养了小麦，发现霉变现彖。进行了基础的配液工作，将实验需要的试剂进行童取和称量。向老师学习了凝胶电泳的使用方法和凝胶的制作。处理：经过我们的讨论和询问老师得知小麦每天需要清洗才能保证每菌被去除。（只需麦芽的生长速度快于霉菌即可）。初步确定了实验时需要的试剂的量和规格，和老师沟通，解决实验时商品供应。9.11实验情况实验任务：完成第一次DN

2、A的提取。实验过程：小麦芽已经部分长成，摘取合适长度的小麦芽进行实验，其他的小麦芽继续放入恒温箱培养。实验时由于在液氮研磨过程屮缺乏液氮保护，造成研磨时小麦芽不能成细分状。（此现彖会对实验结果产生煤响）按步骤完成实验的提取过稈。实验问题研磨：由于小麦芽比校长，且较多量的小麦芽接触液氮后相互间间隙很大，比较蓬松且脆，研磨时很容易使得小麦芽的磨碎物蹦出使得小麦芽损失。研磨时如果不能除净小麦芽上残胡的水分，或者不在液氮的保护下进行实验会对实验结果造成什么影响？SS■苯酚问题：离心管不严，倾倒时苯酚会流出。由于苯酚的腐蚀性，虽然为了防范危险己经戴了手套，但是仍应该在实验时重点提出

3、。第二次离心后的上层水相转入烧杯再转移入离心管比较复杂，能占合并为一步以减少复杂性RNase处理步骤不做对实验的影响。蛋H质离心除去步骤不重复可能造成的影响。实验结果：成功制得了DNA样品。放入冷藏柜冷藏待用。实验计划：准备下一步的实验方法及改进，讨论实验屮出现的问题。9.12实验情况实验目的：为验证实验的有效性以及探索吏优的方法，对实验进行下一步的对照组DNA提取。采用标准方法进行测定，（保证小麦芽表面无水条件下进行实验，同时注意了部分研磨操作,提前预冷了研钵，其他试剂和操作与Z前基本一致）买验结果：成功完成了对照组的DNA提取。熟悉了提取的操作步骤。9.13实验情况实

4、验目的:完成对照纽•实验组的紫外分光测定。进行凝胶电泳。实验过程：在常志静学姐的指导下我们进行了第一次的凝胶电泳实验。虽然提前学习了学姐的指导，但是实验途屮还是发现了许多问题。1如何进样。2如何计算进样量。3如何设计合适的电泳时间保证最好的分离效果。紫外分光测定：第一次进行紫外测定发现DNA样液的数据超过了检出限，仪器显示“OVER”，在和老师的沟通下，发现了仪器上的问题还有比色1111的问题，使得问题得到了解决。紫外分光问题：DNA的稀释倍数不容易确定，差异很大，尤其是和小麦的量，DNA提取操作有很大关系。在和之前做的DNA样液对照试验发现：紫外对照结果：两组数据均超过

5、正常值A260/A280小于1.8显示DNA屮蛋白质含量比较高。琼脂糖凝胶电泳实验表明：研磨时不成粉状的（缺乏液氮保护的）一组颜色较浅（基木无颜色）另一组荧光稍可见。凝胶电泳实验总结：虽然成功讲行了电泳实验，但是效果不是很理想，DNA基木只在原点处没有发生条带移动。载样的大小还不能确定好。木次试验总体总结：实验验证了表面干燥的小麦芽分解相对较少，下次实验戒该加以应用。由紫外数据发现RNA含量不多，解决了Z前是否使用RNAse以纯化DNA的问题。凝胶的制备和电泳操作已经基木清楚。但是是否是由于我们电泳载样量不足造成的荧光不明显我们并不清楚。下次实验目的：对已经验证的实验步骤

6、进行标准化实验，重复试验以确定稳定性。再次进行凝胶电泳的电泳条件的探究。9.13实验情况实验目的：1.对已经验证的实验步骤进行标准化实验，重复试验以确定稳定性。2.再次进行凝胶电泳的电泳条件的探究。3.为了实现我们对实验结果的可控性分析，我们引入了Marker作为标尺鉴定电泳结果。实验过程：木次实验注意到了Z前总结的问题，包括小麦芽的处理，研磨时的液氮保护，防止溅岀，实验的连续性，去掉了转移至烧杯屮的步骤，直接在离心管屮操作。实验的安全性苯酚使用前务必戴手套。凝胶电泳使用了标准的Marker标定进彳亍测定。(goldview)实验结果：最麻处理的DNA进行琼脂糖电泳后显示

7、Marker颜色也不是很深，证明是载样量问题造成的。也证明了我们的凝胶没有问题，电泳仪等设备和我们的电泳操作没有问题。但是我们H己的DNA跑得的结果仍不好，说明我们DNA提取还是存在问题的。9.14实验目的：一方面继续探索DNA提取实验，在途屮进行录像T作。录像过程比较繁琐，途屮多次NG,也有较多技术问题需要克服。1.清晰体现实验过程2.如何突出实验重点3.实验视频详细但是繁简有度，在讲述清楚的条件下尽量节省视频的时间。实验结果：录制了标准化的视频资料，没有进行完整的电泳实验。9.15情况没有进行实验，主要是完成了PPT制作以