免疫组化sp法的总结

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划免疫组化sp法的总结　　免疫组化SP法　　一．实验原理　　SP法是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量47000.同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素是一个碱性蛋白质，经改造后可以转变为中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，IP=~，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。

2、根据研究，SP大约可形成一百万个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所形成的复合物。大量的酶将保证SP具有很高的敏感性。SP兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。　　二．试剂来源　　三．操作步骤　　1．载玻片防脱片处理：可选择APES，捞片后置烤箱60℃60min以使切片紧密粘附。　　2．　　3．切片常规脱蜡30%过氧化氢1份+蒸馏水10份混合，室温10min以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新

3、战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　4．热修复抗原：将切片浸入构橼酸盐缓冲液，高压3min，之后冷却20min，再用PBS洗。　　5．　　6．滴加5%BSA封闭液，室温10min，甩去多余液体，不洗滴加一抗4℃过夜。PBS洗2min，共洗三次。　　7．滴加生物素化的山羊抗兔IgG，37℃30min。PBS洗2min，共洗3次。　　8．滴加试剂辣根酶标记链霉卵白素PBS洗5min，共4次。　　9．DAB显色：使用DAB显色试剂盒(AR1022)。取1ml蒸馏水，加设

4、计盒中A,B,C试剂各1滴，混匀后加至切片。室温显色，镜下控制反应时间，一般5~30min之间，蒸馏水洗涤。　　10．苏木素轻度复染2min，脱水，透明，封片，显微镜观察　　ABC法：ABC代表的是亲和素－生物素－过氧化物酶复合物。利用抗生物素分别连接生物素标记的第二抗和生物素标记的酶。但是此法注意内源性生物素活性的消除，以减少非特异性的染色。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展

5、，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　SP法：是采用生物素标记的第二抗体与链霉菌抗生物素蛋白连接的碱性磷酸酶及底物色素混合液来测定细胞或组织中的抗原。PA是一种金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质，它能与各种动物的IGG的FC段结合，在免疫组化中可作为桥抗体或标记抗体。最大的优点是不受种属的特异性限制。此法还具有染色时间短、灵敏度高、背景染色淡等优点，分子量小，易于穿透组织。　　两者本质的区别是：SABC法的“三抗”是SABC复合物即链酶亲和素－生物素－过氧化物酶复合物；而SP法的“三抗”是过氧化物酶直接与链酶亲和素

6、相连(来自:写论文网:免疫组化sp法的总结)的，没有通过生物素的中介连接。　　SABC步骤：　　切片常规脱蜡、脱水；30％H2O2＋蒸馏水10份混合，室温5－10分钟以灭活内源性酶，蒸馏水洗；将切片浸入枸橼酸盐，微波炉加热至沸腾后断电，间隔10分钟，反复两次进行热修复抗原；滴加5％BSA封闭液，室温20分钟；滴加一抗，37℃1小时30分钟孵育；滴加生物素化山羊抗小鼠IgG，室温下20分钟，PBS洗；滴加试剂SABC，室温下20分钟，PBS洗5分钟×4次；DAB显色：取1ml蒸馏水，加试剂盒中A，B，C试剂各1滴，混匀后加至切片，

7、室温显色18分钟；苏木素轻度复染；脱水，透明封片。显微镜下观察。　　免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。免疫组织化学的方法有多种，其实都大同小异，不同点只是在于显色基团！目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　

8、SP法　　1）脱蜡、水化；　　2）PBS洗2～3次各5分钟；　　3）3%H2O2滴加在TMA上，室温静置10分钟；　　4）PBS洗2～3次各5分钟；　　5）抗原修复；　　6）PBS洗2～3次各5分钟；　　7）滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体。