的分子细胞生物学研究方法-期末

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1、一．陈瑞川（1）Genetransfer---togetstablecelllineA.Transient（短暂的）transfection1.Liposome（脂质体）-mediatedgenetransfer:Lipofectamine（脂质体）transfection2.Ca3(PO4)2–mediatedgenetransfer3.PEI（聚乙二胺）-mediatedgenetransfer4.Electroporation（电穿孔）B.Stabletransfection1.Adenovirusinfection（腺病毒感染）2.Retrovirusinfection（反转录病毒载体

2、法）3.Lentivirusinfection（慢病毒载体转染法）4.Co-transfection.（2）HowtogetStablecellline1.Infectionorco-transfection2.Antibioticsselection3.Coloniesgrowth4.Expressiondetection5.Celllinestorage（3）HomologysearchofexistingcDNAdatabasesGenBankBlastNCBIBlastHomePage:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/GotoProteinBlast

3、PagePasteyourproteinsequenceorenteraccessionnumberofyourproteinintotheboxUsuallyselectProtein-proteinBlast.AK056946HomosapienscDNAFLJ32384fis,cloneSKMUS1000104,weaklysimilartoHomosapiensmRNAforHEXIM1protein,completecds.二．俞春东（1）什么是近交系小鼠？它们有什么特性？有哪些常用的近交系小鼠？答：近交系小鼠：是经连续20代（或以上）的全同胞兄妹交配（或亲代与子代交配）培育而成的小

4、鼠，品系内所有个体都可追溯到起源于第20代或以后代数的一对共同祖先。特性：1.基因位点的纯合性（Homozygosity）近交系动物中任何一个基因位点上纯合子的概率高达99％，因而也能繁殖出完全一致的纯合子后代。2.遗传组成的同源性（Isogenicity）品系内所有动物个体都可追溯到一对共同祖先，个体在遗传上是同源的，基因型完全一致3.表型的一致性（Uniformity）由于基因型的一致，近交系个体的表型也是相同的，在实验中用较少的近交系动物就可获得具有统计意义的结果。4.对外界因素的敏感性（Sensitivity）由于近交系某些生理功能的稳定性降低，对外界环境因素变化的反应更为敏感，这使近

5、交系更容易被制备成疾病模型动物。供研究使用。5.遗传特征的可辨性（Identifiability）每个近交系都有自己的标准遗传概貌，选择适当的遗传监测方法，即可分辨各个近交系。6.遗传组成的独特性（Individuality）每个近交系都具有独特的遗传组成和独特的生物学特性。由于这一特点，采用某近交系所作的实验结果往往不直接代表整个种属的反应，而必须在多个近交系作动物实验，以增加其代表性。7.分布的广泛性（Extensity）同一品系在不同地区不同国家都广泛存在，引种方便并利于研究结果的交流。8.背景资料的可查性（Accessibility）具有一份完整的研究背景资料，便于实验设计和结果分析。

6、国内外常用近交系小鼠1.BALB/c系（1）遗传背景：①起源：Dowell于1913年开始维持的白化小鼠，从1923年开始近亲交配，1932年Snell获得其26代近交系。1985年180代从NIH引到IMLAS。②近交代数：180(美国NIH1985)。③毛色和毛色基因：白化，AA、bb、cc、DD。④主要亚系为BALB/ccd,BALB/cJ,BALB/cAnN等。（2）特性：乳腺癌发病率低，与其他品系相比血压较高，对慢性肺炎敏感，对放射线特别敏感，繁殖期长。（3）应用：广泛应用于肿瘤学、生理学、免疫学、核医学和单克隆抗体等研究中。2.C57BL系毛色黑色（隐性）（1）遗传背景：①起源：1

7、921年Little由AbbyLathrop得到动物后开始近亲交配，育成数个近交系，雌鼠57号与雄鼠52号交配而得C57BL，1937年分开C57BL/6及C57BL/10两系。1985年引到IMLAS。②近交代数：150(Jax,1984)。③毛色及毛色基因：黑色，aa、BB、CC、DD。④主要亚系为C57BL/6J,C57BL/6N,C57BL/10J等。（2）特性：乳腺癌发病率低，对化学致癌