《基因工程》word版

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1、1.基因工程：是按照人们的意愿，依据严密的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，有目的的改造生物物种特性，创造出更符合人们需求的新的物种。2.基因工程的步骤：切连转增检⑴经过酶的剪切，消化，PCR扩增等步骤，分离出带有目的基因的DNA片段⑵将目的基因与带有标记基因的载体相连接，形成重组DNA分子。⑶将重组DNA分子转移到受体细胞中。⑷筛选重组DNA的受体细胞克隆。⑸用筛选出的受体细胞扩增目的基因，供进一步的分析使用。⑹目的基因在新的遗传背景下实现功能的表达，产生出人类需要的物质。3.基因工程今后发展的重点：⑴基因组学的研究⑵基因工程

2、药物的研究⑶动植物反应器⑷生态环境的改善，健康水平的提高，人类生存环境从根本上改善。4.基因工程的三个阶段：1）第一阶段；基因的染色体遗传学阶段，20世纪50以前，主要从细胞染色体水平进行研究2）第二阶段；基因的分子生物学阶段，50年代以后。从DNA大分子水平进行研究。3）第三阶段；反向生物学阶段，近40年代。研究基因的功能与表达的关系5.基因工程的理论基础：1）不同的基因就有相同的物质基础2）基因视可切割的3）基因是可转移的4）多肽与基因之间是有对应关系的5）遗传密码是可以通用的6）基因可以通过复制把遗传信息转递给下一代。6.基因工

3、程的基础研究（内容）：1）基因工程克隆载体的研究2）基因工程受体系统的研究3）工具酶的研究4）目的基因的研究5）基因工程新技术的研究7.基因工程应用研究：基因工程药物无研究，转基因植物研究，转基因动物的研究，其他方面研究。8.DNA体外重组：实在分子的水平上，根据人们的需要以人工的方法，将感兴趣的目的基因在体外与载体DNA分子重组，然后将重组子转入受体细胞，并筛选出表达重组的活细胞，加以纯化、扩增，称为克隆，这一工程也称为DNA体外重组技术。9.DNA体外重组种类10.连接方式：⑴具有互补的粘性末端片段之间的连接；⑵具有平末端两DNA

4、片段连接⑶DNA末端修饰后进行连接。11.连接（重组）类型：：⑴插入重组：外源DNA片段直接插入到另一DNA分子中，正插和和反插各占1/2，重组子需筛选。⑵置换式重组：产生的重组DNA分子上缺失一部分序列被外源DNA片段所置换12.复制子：一个复制单位，从起始位点复制出一个DNA分子或一个DNA片段的核苷酸序列。13.启动子：是一段提供RNA聚合识别和结合的DNA序列，他一般位于表达基因的上游，长度不超过200bp.特点：序列特异性；方向性；位置特性；种属特异性。14.复制起始位点：DNA从一点复制，这一点有一定的核苷酸序列就称为起始

5、位点。15.DNA来源与制备：⑴来源：天然DNA是指存在于生物体内的DNA，包括染色体DNA、质粒DNA。病毒（噬菌体）DNA。线粒体DNA和叶绿体DNA。⑵制备过程：生物材料的自备（采集和保存）、细胞的裂解、DNA或RNA的提取和纯化，乙以及对制备的核酸样品机型的质量监测分析。16.PCR的原理：PCR反应是模仿细胞内发生的DNA复制过程进行的，在体外由酶催化合成特异性DNA片段，以DNA互补链聚合反应为基础，通过DNA变性、引物与模板DNA一侧的互补序列复兴杂交、耐热性DNA聚合酶催化引物延伸等过程的多次循环，获得带扩增的特异性D

6、NA片段。17．PCR的过程：⑴热变性：反应系统加热至90-95℃，使双链DNA变性成两条单链DNA，作为模板。⑵复性：温度降至37-60℃，使引物与模板DNA链相结合。⑶延伸：温度升至70-75℃，耐热性DNA聚合酶催化引物由5-3位端延伸，合成双链DNA.重复以上过程，就可获得特异性DNA片段18.PCR的技术特点：特异性强、敏感性高、快速、简便、队起始材料要求低、一定程度的单核苷酸错配。19.PCR的反应体系：缓冲溶液、引物、DNA聚合酶、4种dNTP、DNA模板和Mg2+20.限制酶与DNA片段化：21.限制酶：能识别双链DN

7、A上的特殊核苷酸序列并使每条连的一个磷酸二酯键断裂的内脱氧核糖核酸酶。22.限制酶的作用：是生物细胞内限制性修饰系统的一部分，防止外来DNA入侵。23.限制酶的来源与种类：来源大部分细菌和少量霉菌；种类：Ⅰ型酶，Ⅱ型酶，Ⅲ型酶。24.限制酶的命名原则：⑴提取这类酶的生物的属名的第一个字母，⑵种名第一，二个字母，⑶变种或品系的第一个字母；若酶存在于质粒上，则用大写字母表示非染色体遗传因子。⑷罗马数字，同种生物中提取顺序。属名（1）+种名（1，2）+菌株（1）+罗马数字25.限制酶的作用机制：限制酶以环形和线性的双链DNA分子为地物，再合

8、适的反应条件下，识别特定核苷酸序列，使两条核糖脸上特定位置的磷酸二酯键断裂，两裂口之间的碱基对的氢键也随之断裂，产生具有3-羟基（OH）和5-磷酸基（P）的DNA片段。26.限制酶的识别序列与切割位点：规律：呈旋转或二重