《基因克隆载体》word版

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1、I逆境胁迫因子主要有干旱、盐渍、低温、水涝等，是限制植物生长和区域分布以及影响农作物产量和质量的重要因素。植物对这些逆境胁迫的适应主要被转录因子和调节基因（诸如控制多重抵御的酶、蛋白等）所介导。现有研究证明，与转录因子活力有关联的是转录辅激活子，它能增强转录因子和顺式作用元件的结合。MBF1是一个转录辅激活子，通过一个激活物和一个TATA盒结合蛋白的桥连作用来调节转录激活。MBF1基因最早是在蚕、果蝇等动物体中被发现，后来在植物中也发现了MBF1基因。据报道，在拟南芥中的MBF1基因的超表达能增强其抵抗

2、逆境胁迫的能力，而在番茄中关于此基因还没有相关的报道，本论文拟通过在番茄中超表达MBF1基因研究其对逆境胁迫的抗性能力，从而明确MBF1基因的分子作用机制，主要研究内容及结果如下：1.番茄MBF1基因的克隆以AC++番茄果实的总RNA为模板，体外反转录合成cDNA，以cDNA为模板，通过PCR扩增得到得632bp大小的片段，将其命名为LeMBF1，并登录NCBIGenBank，登录号为EF051474。将其与拟南芥中的MBF1基因进行同源性比较，在DNA水平上的序列相似性为56%，在氨基酸水平上的序列相

3、似性为82%，是一个新基因。2.Northern杂交技术分析番茄LeMBF1基因的表达特性克隆番茄MBF1（LeMBF1）基因特异片段，以此作为探针,通过Northern杂交技术分析LeMBF1基因的表达特性，结果显示LeMBF1基因的表达能被高温、干旱诱导，被复水所抑制；伤害处理能诱导WT番茄叶片中该基因的表达，对Nr番茄叶片中该基因的表达基本无影响，抑制rin番茄叶片中该基因的表达；外源乙烯处理绿熟期果实，LeMBF1基因的表达变化不明显，说明在这一时期外源乙烯并不诱导LeMBF1基因的表达。3.双

4、元超表达载体pBIN19-MBF1的构建验证的LeMBF1基因与经PstI酶切的pDH51载体通过T4DNA连接酶连接，连接产物转经PCR以及酶切鉴定确为重组中间载体质粒，且外源片段方向正确，命名为pDH51-MBF1。中间载体pDH51-MBF1经EcoRI酶切获得了包含35S启动子、MBF1基因、35S终止子的片段，此片段与经EcoRI酶切的pBIN19载体连接，连接产物经PCR及酶切鉴定确为重组植物双元表达载体质粒，命名为pBIN19-MBF1。4.再生番茄植株的获得以AC＋＋番茄子叶为外植体，通

5、过农杆菌LBA4404介导，将CaMV35S启动子调控下的MBF1基因转入番茄，经过50mg/LKan及500mg/L的Sm筛选，获得一部分生根的再生植株。VIIIABAAbscisicacid脱落酸AmpAmpicillin氨苄青霉素ATPAdenosinetriphosphate三磷酸腺苷BTMBasaltranscriptionalmachinery基础转录机器bZIPafamilyoftranscriptionfactorwithbasicregionandLeu-zippermotif带有碱性

6、区域和亮氨酸拉链的转录因子家族CARM1Coactivatorassociatedargininemethyltransferase1精氨酸甲基转移酶1CaMV35SCauliflowermosaicvirus35Spromoter花椰菜花叶病毒35S启动子cDNAComplementaryDNA互补DNADNADeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸dNTPdeoxynucleotidetriphosphatesdATP/dTTP/dCTP/dGTP的混合物DREBDehydrationR

7、esponsiveElementBinding干旱应答效应元件EBEthidiumbromide溴化乙锭E.coliEscherichiacoli大肠杆菌EDTAEthylenediaminetetraceticacid乙二氨四乙酸REBP/AP2Ethylene-responsiveelement乙烯反应因子GCNGiantcerebralneuron巨大脑神经元HATHistoneacetyltransferase组蛋白乙酰基转移酶HREHormoneresponseelement激素效应元件IPT

8、GIsopropyl-β-D-thiogalactoside异丙基-β-D-硫代半乳糖苷KanKanamycin卡那霉素LBLuria-bertanimediaLB培养基MBF1Multiproteinbridgingfactor1多蛋白桥染因子mRNAmessengerRNA(ribonucleicacid)信使核糖核酸MSMurashigeandskoogmediumMS培养基MYBafamilyoftranscriptionfacto