folin酚法测定蛋白质含量

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1、生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：第一实验室生物化学与分子生物学实验教学中心一、实验室规则1．实验前应认真预习实验指导，明确实验目的和要求，写出预实验报告。2．进入实验室必须穿白大衣。严格遵守实验课纪律，不得无故迟到或早退。不得高声说话。严禁拿实验器具开玩笑。实验室内禁止吸烟、用餐。3．严格按操作规程进行实验。实验过程中自己不能解决或决定的问题，切勿盲目处理，应及时请教指导老师。4．严格按操作规程使用仪器，凡不熟悉操作方法的仪器不得随意动用，对贵重的精密仪器必须先熟知使用方法，才能开始使用；仪

2、器发生故障，应立即关闭电源并报告老师，不得擅自拆修。5．取用试剂时必须“随开随盖”，“盖随瓶走”，即用毕立即盖好放回原处，切忌“张冠李戴”，避免污染。6．爱护公物，节约水、电、试剂，遵守损坏仪器报告、登记、赔偿制度。7．注意水、电、试剂的使用安全。使用易燃易爆物品时应远离火源。用试管加热时，管口不准对人。严防强酸强碱及有毒物质吸入口内或溅到别人身上。任何时候不得将强酸、强碱、高温、有毒物质抛洒在实验台上。8．废纸及其它固体废物严禁倒入水槽，应倒到垃圾桶内。废弃液体如为强酸强碱，必须事先用水稀释，方可倒入

3、水槽内，并放水冲走。9．以实事求是的科学态度如实记录实验结果，仔细分析，做出客观结论。实验失败，须认真查找原因，而不能任意涂改实验结果。实验完毕，认真书写实验报告，按时上交。10．实验完毕，个人应将试剂、仪器器材摆放整齐，用过的玻璃器皿应刷洗干净归置好，方可离开实验室。值日生则要认真负责整个实验室的清洁和整理，保持实验整洁卫生。离开实验室前检查电源、水源和门窗的安全等，并严格执行值日生登记制度。实验名称(TitleofExperimetn)Folin-酚试剂法测定蛋白质含量实验日期(DateofExpe

4、riment)实验地点(LabNo.)合作者(Partner)指导老师(Instructor)总分(TotalScore)教师签名(Signature)批改日期(Date)【实验报告第一部分（预习报告内容）：①实验原理、②实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：】一、实验原理1921年，Folin首创Folin-酚试剂法，利用蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基（酚基）还原酚试剂（磷钨酸-磷钼酸）起蓝色反应；1951年，Lowry

5、对此法进行了改进，先于标本中加碱性铜试剂，再与酚试剂反应，提高了灵敏度。Folin-酚试剂法主要包括两步：第一步双缩脲反应在碱性溶液中，双缩脲（H2NOC－NH－CONH2）能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有与双缩脲结构相似的多个肽键,因此有双缩脲反应。即在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与碱性铜试剂中的Cu2+作用生成紫红色的蛋白质-Cu2+复合物。第二步Folin-酚显色反应Folin-酚试剂在碱性条件下极不稳定，其磷钼酸盐-磷钨酸盐易被酚类化合物

6、还原而呈蓝色反应（钼蓝和钨蓝的混合物）。由于蛋白质中含有带酚羟基的酪氨酸(Tyr)，故有此显色反应。即蛋白质-Cu2+复合物中所含的酪氨酸或色氨酸残基还原酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸，生成蓝色的化合物。在一定浓度范围内，蓝色的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系，故与同样处理的蛋白质标准液比色即可求出样品中蛋白质的含量。另外，可以根据预先绘制的标准曲线求出待测样品中蛋白质的含量。二、实验材料（一）样品健康人血清（稀释300倍）（二）试剂1．牛血清白蛋白标准液（200mg/ml）准确称取牛血清白蛋白粉末50.0mg，

7、用0.1mol/LNaOH溶液润湿溶解，加蒸馏水到250ml。2．碱性硫酸铜溶液①碱溶液：Na2CO32g溶于100ml0.1mol/LNaOH中。②硫酸铜溶液：CuSO4∙5H2O0.5g溶于100ml35mmol/L(1%)酒石酸钾钠中。使用前将①与②按50:1混合即成碱性硫酸铜溶液。使用时新鲜配制。3．Folin-酚试剂在2L磨口回流装置内加钨酸钠（Na2WO4∙2H2O）100g，钼酸钠（Na2MoO4∙2H2O）25g，蒸馏水700ml，14.68mol/L（85%）磷酸50ml，浓盐酸100

8、ml，充分混合后用小火回流10h。冷却后，再加硫酸锂（Li2SO4∙H2O）150g，水50ml，数滴（2~3滴）液体溴（也可用30%H2O26~8滴代替），然后开口沸腾15min，驱除过量的溴（因溴气甚毒，这一步应在通风橱中进行），冷却后加水至1000ml，过滤，溶液呈黄色（如带绿色则不能用），保存于棕色瓶中置冷暗处备用（如配制时间较长，试剂转呈绿色），可再加液体溴数滴，煮沸15min，若能恢复原有的黄色或金黄色仍可继续使用）。（三）仪器