folin-酚试剂法测定蛋白质含量（lowry基本法）

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1、实验8Folin-酚试剂法测定蛋白质含量（Lowry基本法）一目的与要求Folin-酚试剂法测定蛋白质含量的原理和方法。二实验原理Folin-酚试剂（Folin-phenolreagent）的显色原理主要是：试剂中的磷钼酸-磷钨酸混合物被蛋白质还原，形成多种还原型的混合酸，并且有特殊的蓝色。包括两步反应。㈠试剂甲使蛋白质发生烯醇化反应，在碱性条件下，形成蛋白质-铜络合物，从而使电子转移到混合酸中，大大地增强了酚试剂对蛋白质的敏感性。㈡试剂乙（磷钼酸-磷钨酸混合液）受蛋白质中半胱氨酸、酪氨酸、色氨酸和组氨酸等作用，使

2、钨酸、钼酸两者同时失去1个、2个或3个氧原子，还原成含有多种还原型的混合酸，并且有特殊的蓝色。利用蓝色深浅与蛋白质浓度的关系，可制备标准曲线，测定样品中蛋白质含量。本法可测定的蛋白质含量为15-280g/mL。三操作步骤㈠标准曲线制作⒈取试管6支，编号。按表7-2操作，加入牛血清白蛋白标准溶液（200g/mL），补足蒸馏水，使各管容量达1mL。算出各管中实际蛋白质含量，然后按顺序加入定量试剂甲、乙（各管加入乙试剂必须快速，并立即摇匀！），在分光光度计以上波长500nm比色，读取光密度。表7-2Folin-酚试剂

3、法标准曲线制作步骤管号牛血清蛋白标准溶液/mL蒸馏水/mL各管加试剂甲2.5mL，混匀放置10min后，加入试剂乙0.25mL，立即混匀，放置30minOD50010.20.820.40.630.60.440.80.251.00601.02.以各标准溶液浓度为横坐标，各管的光密度为纵坐标作图，得标准曲线。标准曲线必须从零点开始出发，最好能成一直线。画好后，注明所用仪器的型号及编号、所用波长及测定方法、名称及制作日期。㈡样品测定取试管3支，分为测定管和空白管和标准管。测定管内加入1mL待测样品溶液（适当稀释至25-2

4、80g/mL蛋白质）。操作步骤与制作标准曲线相同，见表7-3。待测液mL蒸馏水mL各管加试剂甲2.5mL，混匀放置10min后，加入试剂乙0.25mL，立即混匀，放置10min后比色。OD500空白管01.0测定管1.00标准管1.0（标准液）0四结果与计算根据光密度读数查得标准曲线，计算检测液内的蛋白质含量。进一步可根据检测溶液的稀释倍数及实际所要求的蛋白质浓度换算。本实验要求蛋白质含量浓度以g/L为单位，也可以与测定管同样操作的标准管按下式计算蛋白质含量。测定管蛋白含量=×标准管蛋白质含量测定管光密度标准管光

5、密度