《bace克隆》word版

《《bace克隆》word版》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、图位克隆图位基因克隆原理原自参考文献2　　图位克隆(Map-basedcloning)又称定位克隆(positionalcloning),1986年首先由剑桥大学的Alancoulson提出[5],用该方法分离基因是根据目的基因在染色体上的位置进行的,无需预先知道基因的DNA顺序,也无需预先知道其表达产物的有关信息,但应有以下两方面的基本情况:一是有一个根据目的基因的有无建立起来的遗传分离群体,如F、DH、BC、RI等。二是开展以下几项工作:1)首先找到与目标基因紧密连锁的分子标记;2)用遗传作图和物理作图将目标基因定位在染色体的特定位置;

2、3)构建含有大插入片段的基因组文库(BAC库或YAC);4)以与目标基因连锁的分子标记为探针筛选基因组文库;5)用获得阳性克隆构建目的基因区域的跨叠群;6)通过染色体步行、登陆或跳跃获得含有目标基因的大片段克隆;7)通过亚克隆获得含有目的基因的小片段克隆;8)通过遗传转化和功能互补验证最终确定目标基因的碱基序列。（正文来自参考文献1）细菌人工染色体　　细菌人工染色体（Bacterialartificialchromosome，BAC）是指一种以F质粒（F-plasmid）为基础建构而成的细菌染色体克隆载体，长用来克隆150kb左右大小的DN

3、A片段，最多可保存300kb个碱基对。　　该质粒主要包括oriS，repE(控制F质粒复制）和parA、parB（控制拷贝数）等成分。以BAC为基础克隆的载体成嵌合体的频率较低，转化效率高，而且以环状结构存在于细菌体内，易于分辨和分离纯化，已被科学界广泛接受。人工染色体　　英文：artificialchromosome　　人工构建的含有天然染色体基本功能单位的载体系统，包括YAC、BAC、PAC、MAC和HAEC。染色体基本功能单位包括复制起始点(replicationorigin)、着丝粒(centromere)和端粒(telomere)

4、。复制起始点，保证了染色体复制，着丝粒保证了染色体分离，端粒封闭了染色体末端，防止粘附到其他断裂端，保证了染色体的稳定存在。　　BAC和PAC是用于原核生物大肠杆菌内的人工染色体。BAC是以F因子(fetilityfactor)为基础构建的环形质粒，容量为～300kb，而PAC则以F因子和P1噬菌体(P1phage)为基础构建的环形质粒，容量为130-150kb。它们不是严格意义上的人工染色体，因为它们不含着丝粒和端粒。YAC是酵母人工染色体，它含有着丝粒，复制原点和端粒，能稳定遗传，其容量在100-2000kb。在染色体区带构建YAC重叠

5、群，促进了大规模基因组测序和致病基因的克隆。类似于YAC的MAC尚在研究之中，它含有哺乳动物染色体基本功能单位。如果研究成功，可能成为很好的基因治疗载体和转基因动物载体。　　HAEC是基于人类EB病毒而构建的环形DNA，含有EB病毒的复制原点(oriP)和潮霉素抗性基因。能以环形小染色体形式复制，并在有丝分裂中保持稳定。HAEC可能会成为基因治疗的重要载体。BAC及其转基因研究进展2007-09-2919:09:17　　来自:庞小蜉　　BAC及其转基因研究进展　　胡炜朱作言　　(中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室武汉1

6、0087)　　　　摘要：奉文综述了细菌人工染色体(BacterialArtificialChromsomes，BAC)的构建、物理图谱制作方法及其靶位精细操作策略的研究进展同时，简要介绍了BAC转基因在基因功能以及基因表达与调控研究中的应用。　　关键词：细菌人工染色体转基因　　　　利用转基因动物可有效地研究基因的表达调控及其功能。增强子，座位控制区(MR)及insulators等调控元件对于转基因的高水平组织特异表达和整合十分重要，但这些调控元件常距基因约50kb之遥。传统上，由于受DNA克隆载体容量的限制，制作转基因动物的外源基因片段通常

7、小于20kb，因此某些调控基因活性的重要元素不可避免地被丢失，从而导致转基因的低水平表达及位置效应的产生。人工染色体技术的建立和不断发展，为大基因和太基因簇的转基因研究提供了技术准备。　　1987年，克隆容量可达几百至几千kb的酵母人工染色体(YeastArtificialChromosomes，YAC)问世，并可以通过同源重组的方式在酵母菌中对携带有基因组插人大片段的YAC进行操作，这些操作包括高效地引入报告基因、特定的缺失突变等，鉴于YAC转基因技术不仅保证巨大基因的完整性，保证所有顺式因子的完整并与结构基因的位置关系不变，而且目的基因

8、上下游的侧翼序列可以作为缓冲区域，消除或减弱基因整台后的“位置效应”，使外源基因的表达更接近于真实情况，并为研究基因的功能提供便利。为此，几个研究小组在YAC诞生之始即致力于建立