水杨酸的抑酶与抑菌作用

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1、厦门大学学报（自然版）投稿范文水杨酸的抑酶与抑菌作用郑国兴，张春乐，黄浩，张丽娟，林敏，陈清西*（教育部细胞生物学与肿瘤细胞工程重点实验室，厦门大学生命科学学院，福建厦门361005）摘要：以水杨酸为效应物，研究其酶学效应和微生物效应．实验结果表明：水杨酸对马铃薯多酚氧化酶有明显的抑制作用，半抑制率（IC50）为2.05mmol/L，抑制作用表现为非竞争性的可逆过程，其抑制常数为2.00mmol/L．水杨酸对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌三种细菌和白色假丝酵母、黑曲霉两种真菌均有明显的抑制作用，其

2、最小抑菌浓度（MIC）分别为0.75、0.5、0.5、0.25和0.75mg/mL，最小杀菌浓度（MBC）分别为0.75、1.0、0.5、0.25和0.75mg/mL．本研究为水杨酸在果蔬保鲜中的应用提供实验理论依据．关键词：水杨酸；马铃薯多酚氧化酶；细菌；真菌；抑制作用中图分类号：Q356．1文献标识码：A我国果蔬、蔬菜资源丰富，产量均居世界第一位．然而，因采后处理技术落后，我国果蔬腐烂损失也高居全球榜首，每年因贮藏、运输当中变质的果蔬占总产量的1/7，造成巨大的经济损失．导致果蔬腐烂变质主要有微生物感

3、染和酶促褐变两种[1~3]．其中，引起果蔬腐败的微生物主要有细菌、杆……1材料与方法1.1材料水杨酸、KCrO4、庆大霉素均为国产分析纯试剂[1~3]．马铃薯多酚氧化酶由本实验室制备．L-3,4-二羟基苯氨酸（L-DOPA）为Aldrich化学公司产品．大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色假丝酵母、黑曲霉均由厦门大学生命科学学院微生物教研室提供……1.2方法（1）PPO活力测定参考文献[4]方法，在50mmol/L磷酸缓冲溶液（pH6.8）中，以0.5mmol/LL-DOPA为底物，30℃下测定波

4、长为475nm的光密度值（OD475）随时间的增长直线，从斜率计算酶的活力，产物的消光系数按3700L/(mol×cm)计算[5]．……（2）微生物实验抑菌实验：采用琼脂渗透法，在已经培养好的斜面培养物中分别加无菌生理盐水5mL，用接种环刮下菌苔制成菌悬液，分别取菌悬液1mL加到已融化又冷却至适当温度的100mL……收稿日期：2005-12-22基金项目：福建省科技攻关课题（2004N002）和国家自然科学基金（30570408）资助作者简介：郑国兴(1978~)，男，硕士研究生．*通讯作者：chenqx

5、@jingxian.xmu.edu.cn32实验结果2.1水杨酸对马铃薯PPO抑制效应图1.水杨酸对马铃薯PPO抑制效应.线1-5水杨酸的浓度为0,0.4,0.8,1.2,1.6mmol/LFig.1Lineweaver-BurkplotsofpotatoPPOinhibitedbysalicylicacid.研究水杨酸对马铃薯PPO抑制作用类型，在测活体系中，固定酶的浓度，改变底物L-DOPA浓度，测定不同浓度抑制剂对酶的活力的影响．由Lineweaver-Burk双倒数作图得到一组横轴截距不变的直线，

6、说明这一组抑制剂不影响米氏常数(Km)，只影响最大反应速度(Vm)，其抑制机理表现为非竞争性类型，以不同浓度抑制剂下测定的1/Vm对抑制剂浓度作图(图1内插图)为一条直线，从直线的斜率可以求得抑制常数(KI=KIS)为2.00mmol/L．表1.琼脂渗透法测定结果Tab.1Theassayresultoftheagardiffusionmethod效应物浓度E.coliB.subtilisSt.aureusC.albicansA.nigerDMSO≥99.0％−−−−−庆大霉素80U/mL2220(±)2

7、5−−KCrO41mg/mL−−−14(±)16(±)水杨酸401815221212注：“±”表示抑菌圈模糊，“−”表示无抑菌圈．3讨论……本文研究结果表明，水杨酸对于马铃薯PPO具有明显的抑制作用，它对该酶的活力表现为可逆非竞争性抑制作用．这说明抑制剂与酶分子的结合及底物分子与酶的结合是相互独立的，抑制剂不改变酶对底物的亲和力；抑制剂可以同时与游离酶(E)和结合酶(ES)结合，且结合常数相同．这也说明了水杨酸在酶分子上的结合位点并不在活性中心，而是活性中心以外的区域．因此，水杨酸作为马铃薯PPO的强效抑

8、制剂，可望成为除抑菌功效外，同时能够防止果蔬产生酶促褐变的保鲜剂．3参考文献：[1]王成云．葱头腐烂的原因及防治对策[J]．北方园艺，2002，34（4）：68－69．[2]AlvarezAM．PostharvestDiseasesofPapaya[C]．NewYork,SpringerPress,1987：123－125．[3]陈清西,柯莉娜，王勤，等．联苯基甲醛与联苯基甲酸[M]．厦门：厦门大学出版社，2004．[4]黄璜