金花茶体胚发生的调控及其解剖学和蛋白质组学研究

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1、福建农林大学硕士学位论文摘要本试验以金花茶(CamellianitidissimaChi．)成年材料离体再生体系为材料来源，进行了体胚发生调控、发育解剖学观察，并对金花茶正常体胚发育和花状多子叶形胚体胚发育途径不同阶段的离体培养材料进行了蛋白质表达的双向电泳分析。金花茶花状多子叶形胚这一异常发育途径，是植物离体形态发生的一种特殊现象，在其他植物上未见报道。对该现象的研究，有助于了解植物离体形态过程的一些特殊机制，对完善发育生物学理论有重要意义．本试验主要研究结果如下：1、比较了不同激素组合对金花茶愈伤组织诱导的影响

2、。发现将本实验室原有的金花茶体胚增殖再生系统中获得的子叶胚切块后接种在附加2mg／L2,4·D和lmg／LKT的培养基上每7d继代一次，诱导出的部分愈伤组织，在不添加激素的分化培养基上分化出体胚，并且相当数量都是花状多子叶形胚类型。2，建立了金花茶花状多子叶形胚发育途径的体胚循环蒋生系统。通过逐步提高培养基渗透压，经过逐代筛选，在附加O．22mol／L甘露醇和0．12mol／L蔗糖的MS培养基上获得基本一致的花状多子叶胚。将体胚转入附加0．2mol／LNAA和2mol／LBA的I／2MS培养基中，体胚变红甚至褐变，

3、最后在褐变的胚体表面又生长出较同步的同一类型的次生胚。将其重新接种到原培养基上，又可重复这一发育途径。3、将花状多子叶形胚不同发育阶段的离体培养材料制作石蜡切片，并与正常发育的材料进行对比，发现了其组织形态上具有特殊性。同时发现子叶向真叶的转化是从两端叶缘向主脉方向进行的。与拟南芥船突变体比较，发现二者不是同一类型的突变。4，用双向电泳的分析方法，得到了金花茶正常体胚发育途径和花状多子叶形胚体胚发育途径球形胚、子叶胚、成熟胚和幼苗4个阶段的离体培养材料以及2mg／L2,4-D和lmg／LKT的激素组合诱导的愈伤组织

4、的总蛋白的双向电泳图谱。金花茶正常体胚发育途径，从球形胚阶段发育至子叶胚阶段，明显消失或减弱的蛋白有4个：CnPGl(63．9kD)、CnPG2(29．9kD)、CnPG3(30．6kD)、CnPG4(29．1kD)，其中CnPG2(29．9kD)，CnPG3(30．6kD)和CnPG4(29．1kO)从子叶胚阶段开始明显减弱；而在子叶胚阶段明显新增的蛋白。有9个：CnPCI(73．3kD)，CnPC2(70．5kD)、CNPC3(35．4kD)、CnPC4(44．1kD)、CNPC5(28．4kD)、CnPC6(

5、20．1kD)、CnPC7(19．1kD)、CnPCS(17．4kD)、CnPC9(19．0kO)，其中CnPCI(73．3kD)和CnPC2(70．5kD)在随后的发育进程中逐渐减弱，在幼苗阶段完全消失。从子叶胚发育至成熟胚阶段，明显消失或减弱的蛋白有25个CnPCI0(58．4kD)、CNPC4(44．1kD)、CnPCI1(48．1kD)、CnPCI2(45．0kD)、CnPCI3(40．OkD)、CnPCI4(19．0kD)、CnPCI5(42．1kD)、chat6(20．1kD),CnPG4(29．1kD

6、)，CnPC7(19．1kD),CnPCI6(23．0kD)、CnPCI7(18．8kD)、Chat9(19．0kD),CnPC8(17．4kD)，CnPCIS(21．3kD)、CnPCI9(35．1kD)、CNPC20(29．2l①)、CnPC21(30．4kD)、CNPC22(20．7kD)、CNPC23(19．0kD)、CnPC24(18．9kD)、CNPC25(16．0kD)、CNPC26(32．6kD)、Cnl6C27(32．3kD)、CnPC28(28．4kO)。其中CAPC4(44．1kD)、CnPC

7、6(20．1kD)，CnPC7(19．IkO)、CnPC8(17．4kD)和CnPC9(19．0kD)仅在子叶胚阶段出现，CnPG4(29．1kD)在球形胚阶段开始明显减弱，至子叶胚阶段完全消失。而在成熟胚阶段新出现的蛋白有3个CnPMlf21．0kD)、CraM2(19．5kD)、CnPM4(15．-3kD)，CnPM3(16．3kD)明显增强。成熟胚发育到幼苗阶段，明显消失的蛋白有16个：CnPMS(72．5kD)、CnPM6(73．IkD)、CnPM7(60．6kD)、CnPM8(71．IkD)、CnPG2(

8、29．9kO)、CnPG3(30．6kD)、CnPM9(27．6kD)、CnPMl(21．0kD)、CnPMl0(21．5kD)、CnPMl1(21．0kD)、CnPMl2(20．0kD)、CnPM3(16．3kD)、CnPMl3(15．TkD)、CnPMl4(14．1kD)、CnPMl5(13．IkD)、CnPMl6(12．2kD)。其中CnPMl(21．