壳寡糖的酶法制备研究及其初步分离

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1、壳寡糖的酶法制备分析及其初步分离．摘要．壳聚糖有丰富的资源，在食品、医药、环保领域有广泛的应用，但壳聚糖的分子量大、水溶性差，限制了它的应用。壳寡糖是其降解产物，它不但保留了壳聚糖的某些功能特性，还有良好的水溶性等特点，更具有应用价值。酶法降解是广泛使用的降解方法，可选择特异性的切断p一1，4糖苷键，反应条件温和、过程易控制，可通过条件的控制得到不同分子量范围的壳寡糖。本课题以实验室保藏的一株产壳聚糖酶菌株朋弧螂妇sp．14l一2为研究对象，主要围绕酶法降解壳聚糖的方向展开工作，首先对菌株产酶的发酵阶段进行优化来提高酶活，继而对该酶降解壳聚糖底物的条件进行优化，然后对酶解产物

2、进行了分析检测，最后对酶解产物进行初步的分离纯化。具体研究结果如下：1、采用菌体富集和诱导产酶两步法对菌株发酵阶段进行优化，菌体富集阶段优化后的培养条件为：2．5％葡萄糖，O．9％蛋白胨，0．14％K2HP04，0．06％KH2P04，O．1％MgS04，180nlL／1000mL，30℃，180叩m；优化后的诱导条件为：1．5％的壳聚糖底物诱导3d。最终，菌浓度是起始条件的3倍，酶活由最初的3．5I，／mI．提高到了6．1U／n[1L。2、采用单因素实验对酶解条件进行了优化。最适条件为：底物浓度3％，pH5．2～5．6，温度65℃，加酶量7U／g壳聚糖。该酶适合降解脱乙酰度

3、居中(85％左右)的壳聚糖。3、对酶解产物进行了分析检测。通过水解产物的TLC图和平均聚合度联系可得，该酶主要以内切方式随机水解壳聚糖，酶解产物为不同聚合度壳寡糖的混合物。本研究还摸索出了通过选择不同的加酶量和酶解时间得到所需分子量的壳寡糖的方法。4、对低聚壳聚糖进行了初步分离。采用乙醇分布沉淀法对酶解产物进行初步分离，75％乙醇沉淀即可除去聚合度约为9以上的壳聚糖，87．5％乙醇沉淀则可除去聚合度约为7以上的壳聚糖。关键词：壳聚糖；酶解；壳寡糖；壳聚糖酶华中农业大学20ll届硕士研究生学位论文AbstractChitosaIlisrichiIlnatIlrea11d“haS

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