nfκb在1溴丙烷致大鼠中枢神经毒性中的作用

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1、CATALoGUEChineseAbstract．1EnglishAbstract．．5Abbreviation9Introduction11MaterialsandMethods15Results．．26Disccussion．49Conclusions54References．．55Acknowledgements66ListofPublishedPapers．．67万方数据山东大学硕士学位论文NF．KB在1．溴丙烷致大鼠中枢神经毒性中的作用研究生王增金导师赵秀兰教授中文摘要研究目的1一溴丙烷(1也romopropaIle，1一BP)，又名正溴丙烷，溴代正丙烷等，是一种无色

2、透明的有机溶剂，可通过正丙醇与氢溴酸或溴化钠反应得到。1．BP具有易挥发、不易燃、对臭氧层破坏小以及在空气中的半衰期短(17．5天到24天)等特点，因此从20世纪90年代1．BP逐渐成为消耗臭氧层物质(ozonedepletingsubstance，ODS)如氟利昂类的替代剂。1一BP也被广泛应用于药物、杀虫剂、芳香剂和其它化学试剂制造的中间体；还作为脂肪、树脂、石蜡的溶剂和一些精密电子仪器的清洗剂。中国是1．BP主要生产国，2008年的年产量就达到了20，000吨，其中约五分之二用于出口。随着1．BP需求量的不断增加，1．BP接触和使用的人群也在不断扩大。流行病学调查和实验研

3、究都观察到1．BP能够引起中枢神经系统(centralnervoussystem，CNS)和周围神经系统(peripheralnervoussystem，PNS)异常。有研究证实cNS的异常早于PNS。从1999年美国报道了第一例】一BP职业中毒患者之后，各国l—BP中毒病例也相继报道，我国也已发现1．BP中毒患者。目前1．BP神经毒性的确切机制不清，临床上也没有治疗l—BP神经中毒的特效药物。动物实验观察到1．BP能够明显减少实验动物大脑内还原性谷胱甘肽(glutathione，GSH)的含量，产生氧化应激。体外实验观察到1．BP能够激活巨噬细胞内的核因子一KB(nucler

4、factorkappaB，NF．KB)，但1一BP是否能够激活CNS的NF．KB，以及NF．KB的激活是否与1．BP的神经毒性相关尚未报道。因此在本实验研究中，我们首先观察了1一BP染毒后大鼠大脑内GSH的变化，并观察了大脑中氧化应激感受器NF—KB和Nrf2的激活情况，及NF—KB下游炎性因子的应答变化和Nrf-2下游Ⅱ相酶Y．谷氨酸半胱氨酸连接酶(91ut锄atecysteine1igase，GcL)和谷万方数据山东大学硕士学位论文胱甘肽还原酶(91utathionereductase，GR)的变化。在1。BP染毒同时给予NF一1(B抑制剂．吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrr

5、olidinedithiocarbamate，PDTC)，观察动物神经行为学改善、大脑中GSH的变化以及NF．KB和Nrf-2的激活情况，推断NF．KB在1．BP致大鼠中枢神经系统毒性中的作用，探讨l—BP致中枢神经系统损伤的机制，以期为1．BP的预防和临床治疗提供可以借鉴的依据。研究方法1．实验动物分组和处理：60只雄性Wistar大鼠(220—2409)适应性喂养5天后随机分成4组，即对照组、1．BP染毒组、PDTC+1一BP组以及PDTC对照组，每组15只。1一BP染毒组和PDTC+1．BP组每天经口给予800mg／1(g．bw1一BP，对照组和PDTC组每天灌胃等体积玉

6、米油，灌胃体积均为2ml／kg．bw。PDTC组和PDTC+1一BP组每天经腹腔注射剂量为100mg／l(g．bw的PDTC；对照组和1一BP组每天注射同等体积的生理盐水，注射体积为5ml／l(g．bw。连续给予13天，其中从第8天到第13天每组随机取10只大鼠进行Mo玎is水迷寓实验。水迷宫实验结束后动物断头处死，在冰上迅速剥离大脑皮层，液氮速冻后置于．80℃冰箱待后续实验检测。每组剩余5只大鼠进行心脏灌注，制备冰冻切片用于后续研究。2．MoHis水迷宫试验：从第8天开始每组随机取10只大鼠进行连续6天的Moms水迷宫试验(第一天为训练，数据不记录)，记录40只大鼠的学习能力

7、包括游泳总路程、逃避潜伏期，以及空间记忆指标一穿越平台次数。3．免疫组化检测：制备各组动物大脑的冰冻切片，然后采用免疫组化检测各组大鼠大脑前额叶皮质的神经元、小胶质细胞以及星形胶质细胞的形态和数目变化。4．氧化应激指标的检测：采用试剂盒分别检测大脑前额叶皮质GSH、GSSG含量，计算GSH／GSSG的比值，并检测1，．GCL和GR的活性：检测大脑内一氧化氮(nitricoxide，NO)的含量和一氧化氮合成酶(nitricoxidesvnthase，NOS)的活性变化。5．W色stemblo