mapk在葛根素白藜芦醇促成骨细胞增殖分化和抑凋亡中的作用

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1、p38MAPK在葛根素、白藜芦醇促成骨细胞增殖、分化和抑凋亡中的作用摘要目的探讨p38MAPK信号转导通路在178．雌二醇(17B．E2)、葛根素(Ptm)和白藜芦醇(RES)促成骨细胞(OB)增殖、分化、抑凋亡中的作用。方法1．用酶消化法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞，观察细胞形态，碱性磷酸酶(创LP)染色和矿化结节染色鉴定OB。2．采用第二代细胞，接种24h后分为对照组(Contr01)；不同浓度(1ar8．10击tool·L-1)的178．E2、PUE和RES组；含阻断剂组178．E2+SB、PUE+SB和RES+SB，先加入SB203580(10,umol·L-1)作

2、用30分钟预先阻断p38MAPK信号转导通路，再加入上述浓度的178．E2、PUE和RES，培养72h后用M'IT法测定细胞的增殖能力，PNPP法检测ALP活性；茜素红染色计数矿化结节，测定钙(Ca)沉积量；反映OB矿化能力。3．细胞培养8d后采用RT．PCR半定量法测定10-Smol·L．1含与不含阻断剂的175．E2、PUE和RES组及对照组的I型胶原(CoilI)mRNA表达，反映向OB分化状况。4．第二代OB，接种24h后换无血清培养并分为对照组，10‘8tool·L-1含与不含阻断剂的17B．E2、PUE和RES组，培养72h后在AnnexinV．FITC／PI双

3、标记流式细胞仪上分析细胞早期凋亡。结果1．与对照组相比，17B．E2、PUE和RES各浓度MTI"值均显著增高伊

4、UE+SB和RES+SB各组矿化结节数目及钙含量显著下降(P

5、PUE和RES促OB的分化、矿化和I型胶原的表达过程中发挥重要作用，而对其促OB的增殖和抑制凋亡的作用无明显影响。关键词p38MAPKt成骨细胞；增殖；分化；凋亡；1713．雌二醇；葛根素；白藜芦醇UEffectsofP38ML廿KontheProliferation、DifferentiationandInhibitedApoptosisofMurineOsteoblastsbyPuerainandResveratr01．AbstractObjectiveToinvestigatetheeffectsofp38MAPKontheproliferation、differen

6、tiationandinhibitedapoptosisofmurineostcoblastsby17B—estradiol，puerainandresveratr01．Methods1．ThenewbornSDmicecalvariumosteoblasts(OB)wereisolatedanddigestedwithtrypsinandcollagenaserepeatedly,whichwerethenculturedandobservedthemorphologiccharacterbothinthelightandphase-contrastmicroscopy．

7、OBWasidentifiedbycytochemicalstainingofalkalinephosphatase(ALP)andthemineralizationnodeswerestainedbydifferentstaining．2．ThesecondpassagaeofOBwereplacein96-wellcultureplatesandincubatedfor24h，dividedtocontrol，variousconcentrationsof17B·estradiol，puerarinandres