病毒感染实验诊断.doc

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1、病毒感染实验诊断1.（1）一般原则是特异敏感、快速和简便。首先根据流行病学和临床特点，初步判断可能感染的病毒。（2）然后根据可疑病毒的生物学特点、机体免疫应答和临床过程，以及病人当前所处的时机，确定实验诊断方法。2.（1）对潜伏期短，发病时尚无抗体产生，可选择测定病毒颗粒、病毒抗原或核酸。（2）对潜伏期超过十天的感染，可检测特异性的IgM抗体来进行早期快速诊断，及区别初次和再次感染。（3）对可在体内形成持续感染或潜伏感染的病毒，可检测急性期和恢复期双份血清的IgG抗体有无4倍以上升高，或直接检测病毒核酸。（4）对原因不明或有新病毒感染时，应采集标本进行病毒分

2、离，同时应采取双份血清以确认分离的病毒为病原体。（5）对同一症状可有多种病毒引起的情况，应同时检测几种相关病毒的病毒颗粒、抗原或抗体。（6）对由多个型别组成的病毒可测定它们的共同抗原。第一节标本采集与运送一、标本的采集1.采样时间：尽可能在发病的初期，急性期或患者人院的当天进行。2.标本种类的选择：根据临床感染的症状及流行病学资料，判断可能感染病毒种类，选择相应部位采取标本。常见分离病毒标本的选择：3．常见标本的采集方法(1)血液：以无菌取抗凝血10ml。抗凝选用100n／ml肝素钠。用于分离CMV、HSV，、黄病毒、EBV、HIV-1及新生儿肠道病毒。(2

3、)脑脊液：以无菌取脑脊液1～2ml，冰浴立即送检。在4℃可存放72h。用于分离柯萨奇病毒、ECHO病毒、肠道病毒、腮腺炎病毒。(3)宫颈或阴道拭子：采取病灶部位分泌物，或将拭子伸人宫颈约lcm停留5秒取出，冰浴立即送检。用于分离HSV、CMV。(4)粪便标本：取2～4ｇ粪便加10ml运送液立即送检，用于分离腺病毒、肠道病毒和轮状病毒。(5)含漱液：用无菌生理盐水让患者含漱。用于分离流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、RSV等。(6)喉拭子：用压舌板避免唾液污染，用拭子采取咽喉部表面。用于分离腺病毒、CMV、肠道病毒、HSV、流感病毒等。(7)尿道拭子及尿液标本：尿

4、道拭子伸人尿道4cm转动3次，以获得较多的上皮细胞，用于分离CMV和HSV。(8)尸检标本：死亡后尽早采集各种器官，分别使用器械和容器。二、标本的运送和保存1.病毒抵抗力弱，室温中容易灭活，用于分离培养的标本要尽快送检，4℃下数ｈ或-70℃。冻存液中加入甘油或二甲基亚砜(DMSO)等作保护。2.病毒传送培养基以Hanks液为基础加灭活的小牛血清。为抑制细菌生长加青霉素100U／ml和链霉素100μg／ml，为了抑制真菌的生长加入2．5μg／ml二性霉素B或40μg／ml制霉菌素。第二节病毒分离与鉴定一、病毒的分离方法1.组织细胞培养根据细胞的来源、特性和传代

5、次数分为：(1)原代细胞培养：将细胞悬液。加入营养液培养。形成的单层细胞，称之为原代细胞。(2)二倍体细胞株：仍保持二倍体特性。寿命一般为40～50代，如人胚肺细胞。广泛用于病毒分离和疫苗制备。(3)传代细胞系：来于肿瘤细胞，染色体特征类似肿瘤细胞。常用的有人宫颈癌细胞(Hela)、人喉上皮癌细胞(Hep-2)。2．鸡胚接种鸡胚是用于分离粘病毒科、疱疹病毒、痘类病毒的较为理想的材料。3．动物接种动物对病毒的敏感性是不同的，选择合适动物十分重要。小鼠、乳鼠、家兔、豚鼠、猴等常用于分离病毒。常用于病毒分离的细胞二、病毒的鉴定：必须通过全面了解其特性才能得到鉴定。

6、1.根据临床特点，流行病学资料，标本来源，大致了解病毒的一些特性，有助于确认病毒的种类。2.动物感染范围及特点病毒感染动物的范围、发病的潜伏期。3.细胞培养特点。综合上述1/2/3资料作出鉴定。4.病毒鉴定的方法（1）细胞培养的结果观察：病毒增殖后导致细胞发生：①细胞病变效应(CPE)。细胞肿大，变圆堆积成葡萄状，细胞溶解出现空斑，细胞融合形成多核巨细胞，胞浆内或核内出现嗜酸性或嗜碱性包涵体等；②不出现细胞病变现象。③细胞培养液pH的变化。（2）中和试验：病毒与特异性抗体进行免疫反应，使病毒失去感染性，在细胞培养和活的机体内不出现病变的试验。常用细胞培养进行

7、中和试验。如果特异性抗体能中和病毒，使之失去感染性，不出现细胞病变效应，则该病毒为特异性抗体的同型病毒。用于病毒的分型诊断最具敏感和准确性。也可用于检查患者病后或人工免疫后，机体血清中抗体增加情况。（3）空斑或蚀斑形成试验：空斑是指在单层细胞中被病毒感染引起死亡的细胞区域，周围被活细胞包围。一般而言，一个空斑是由一个感染性病毒颗粒感染所引起的。不同的病毒引起的空斑形态和大小不同。可进行病毒颗粒的计数、纯化，结合中和试验可进行病毒的鉴定。（4）干扰现象：某些病毒间存在着干扰现象，如某些型别的鼻病毒能干扰以后进入的副流感病毒的增殖，从而阻抑后者的红细胞吸附作用。

8、（5）红细胞吸附及吸附抑制试验：正粘病毒，副粘病毒感