hiv1 tat蛋白对hsv2激活kshv裂解性周期复制的影响

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1、南京医科大学硕士学位论文论文独创性声明本论文丛!坠曼鱼!蛋自盟丛曼坠2邀活K苎旦y型鲤性周翅复剑的髭堕是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均在论文中作了明确的声明并表示了谢意。专业：罕貉凄碰作者签名：肆日期：论文使用授权声明本人完全了解南京医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签

2、名：导师签名：日期：南京医科大学硕士学位论文HIV-1Tat蛋白对HSV-2激活KSHV裂解性周期复制的影响摘要卡波济肉瘤(Kaposi’Ssarcoma，KS)是获得性免疫缺陷综合征(acquiredinlmunodenciencysyndrome，AIDS)患者晚期发生率最高的恶，『生肿瘤。既往研究证实，其病原卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’ssarcoma-associatedherpesvirus，KSHV)不能独立引发KS，还需要协同因子的参与。然而促使KSHV；I友KS的因素目前还未完全清楚。已经证明，人类单纯疱疹病毒1型(herpessimplexvir

3、us1，HSV-1)、人巨细胞病毒(humancytomegalovirus，HCMV)，人类疱疹病毒6型(humanherpesvirus6，HHV-6)和人类免疫缺陷病毒1型(humanimmunodeficiencyvirustype1，HIV-1)反式激活蛋白(transactivativetranscriptionprotein，Tat)是激活KSHV裂解性周期复制的重要协同因子。鉴于HIV-1血清阳性人群中人类单纯疱疹病毒2型(humanherpessimplexvires一2，HSV-2)阳性率远高于HIV-1阴性人群，HSV-2与HIV-1之间密切相关，本研

4、究我们进一步探讨了HSV-2影响KSHV复制的潜能以及HIV-1Ta讨该过程的影响。实验首先将HSV-2标准株333感染原发性渗出性淋巴瘤[primaryeffusionlymphoma，PEL，又称体腔渗出性淋巴瘤(bodycavity-basedlymphoma，BCBL)】来源的BCBL一1细胞，Westernblot结果显示，HSV．2感染BCBL．1细胞72h后HSV．2型特异性糖蛋白G一2(glycoproteinG．2，gG一2)开始稳定表达。实时荧光定量聚合酶2南京医科大学硕士学位论文链式反应(Real—timequantitativepolymerasec

5、hainreaction，Real—timePCR)检测结果表明，HSV．2感染可以诱导KSHVORF50(KSHV周期复制的开关基因)、ORF26(编码KSHV次要衣壳蛋白)和ORF29(编码KSHV包装相关蛋白)mRNA转录水平升高。与对照组比较，HSV．2感染组3、6、12、24、48、72和96hORF50mRNA水平分别升高了9．92、2．55、227、31．6、6．6、75和3．02倍(P<0．05)。类似地，ORF26mRNA表达水平在3～96h也呈现不同程度的升高，而ORF29mRNA表达水平的升高集中在48～96h。免疫荧光测定(immunofiuores

6、cenceassay，IFA)结果显示，HSV．2感染BCBL．1同时还可诱导KSHV裂解周期蛋白的表达。虫荧光素酶报告实验验证了HSV．2对ORF50启动子的直接激活作用。进一步将HIV．1Tat质粒转染HSV．2感染的BCBL一1细胞，采用Real—timePCR和Westernblot分别检测KSHVORF26mRNA转录和病毒白细胞介素6(ViralInterleukin一6，vIL一6)的表达。与单纯HSV-2感染比较，KSHVORF26mRNA转录水平在6、24、48和72h分别升高了3．92、1．67、2．74和1．82倍(P

7、6—72h同样有不同程度的升高。虫荧光素酶报告实验显示，Tat可以增强HSV．2激活KSHVOI强50启动子活性。以上结果提示，HSV-2可能通过诱导KSHV复制来提高病毒载量从而参与KS的致病过程；HIV-1Tat能够增强HSV．2对KSHV的激活作用。关键词：HSV．2，KSHV，激活，卡波济肉瘤，HIV，1Tat3南京医科大学硕士学位论文HerpesSimplexVirus2ActivatesLyticCyclesReplicationofKaposi’SSarcoma—AssociatedHerpesvir