amhyamh及其受体amhrⅱ对尼罗罗非鱼雄性性别的决定作

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1、独创性声明学位论文题目：垒丛丝鲤鱼厘甚受住垒迪坦盟屋星矍韭鱼雄性性别数迭定佳旦本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中已加了特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同仁在文中作了明确说明并表示衷心感谢。学位论文作者：咫压兹莸签字日期游／月q-日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院(筹)可以将学位论文的全

2、部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：口不保密，口保密期限至年月止)。学位论文作者签名：趱翮虢乏出痔签字日期如，声石月弘日万方数据理学硕士学位论Amhy／Amh及其受体Amhrll对尼罗罗非鱼雄性性别的决定作用动物学专业硕士研究生赵九娥指导教师王德寿教授本研究受国家863高科技研究发展计划(2011AAl00404)，国家自然科学基金重点项目(31030063)和教育部优先发展领域项目(20130182130003)资助。西南大学生命

3、科学学院二零一五年四月一苓一直，半四月中国·重庆万方数据TheroleofAmhy／Amhandme打receptortilapiamalesexdeterminationThisworkwassupportedbygrant2011AAl00404fi=-omtheNationalHighTechnologyResearchandDevelopmentProgram(863program)ofChina；grant31030063fromtheNationalNaturalScienceFoundationofChina；gra

4、nt20130182130003fromtheSpecializedResearchFundfortheDoctoralProgramofHigherEducmionofChina．SchoolofLifeScience，SouthwestUniversityChongqing。ChinaApril15，2015万方数据目录摘要IAbstract．．1Ⅱ第一章文献综述．11脊椎动物的性别决定11．1哺乳类的性别决定．11．2鸟类性别决定一21．3爬行类性别决定．31．4两栖类性别决定．31．5鱼类性别决定．42无脊椎动物的性别决定

5、52．1果蝇的性别决定．52．2秀丽隐杆线虫的性别决定．．53性别决定基因的研究进展．63．1转录因子．63．1．1SRY／Sty．．63．1．2Sox9．．．．．．．．73．1．3Sox3．．73．1．4而x胗83．1．5Dmy．．83．2非转录因子．93．2．1Amhy93．2．2AmhrlI．93．2．3Gsdf．．103．2．4Sdy：．．．114Arab及AmhrlI的研究现状115科学问题的提出和本研究的目的意义．．14第二章通过缺失功能和获得功能研究Amhy／Amh在尼罗罗非鱼性别决定中作用．．171前言．．172材

6、料、仪器与方法．182．1实验动物18万方数据2．2实验试剂和仪器一182．3有关试剂的配制一192．4实验方法一212．4．1罗非鱼Amhy／AmhCRISPR／Cas9敲除．，212．4．2Amhy／Amh突变F1代的建立．252．4．3罗非鱼ArabyZArab过表达对性腺的表达影响253结果与分析．273．1靶位点的选择．．273．2敲除效率及突变率的统计283．3敲除阳性鱼性腺免疫组化检测结果293．4敲除阳性鱼激素水平测定303．5敲除阳性鱼An出yAmh筛选及建系303．6，4m叫‘4mIjF1突变类型及表型分析31

7、3．7XX个体，4m趣∥4m6过表达阳性鱼的筛选．323．8XX过表达鱼性腺表型及表型检测．．324讨{仑．．334．1Amhy／Amh缺失功能研究334．2Amhy／AmhF1代缺失功能研究354．3AmhyAn曲获得功能研究35第三章罗非鱼AmhrII表达及功能的初步研究一37l前言372材料、仪器与方法．382．1实验动物．．382．2实验试剂和仪器一382．3材料方法．．382．3．1AmhrlI氨基酸序列比对382．3．2AmhrlI共线性分析．．382．3．3罗非鱼成体组织中AmhrlI的表达．382．3．4罗非鱼4m

8、丘f=玎CⅪSP刚CaS9敲除一393结果与分析．393．1AmhrII氨基酸同源性比对393．2AmhrlI共线性分析．．393-3组织表达模式分析403．4AmhrlI在不同时期性腺中的表达41万方数据3．5敲除序列的选择以及突变检测423．6