苯并（a）芘对雄性罗非鱼肝脏vtg mrna表达的影响

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1、生态环境学报2013，22(11)：1837—1840http：／／www．jeesci．tomEcologyandEnvironmentalSciencesE—mail：editor@jeesci．tom苯并(a)芘对雄性罗非鱼肝脏VtgmRNA表达的影响宋超1，范立民1，孟顺龙，裘丽萍，贾旭淑，胡庚东，陈家长1．中国水产科学研究院淡水渔业研究中心，江苏无锡214081；2．南京农业大学渔业学院，江苏无锡214081摘要：卵黄蛋白原(Vitellogenin，Vtg)是检测环境雌激素的重要生物标志物，雄性鱼类V

2、tgmRNA是检测环境雌激素的新兴生物标志物。为研究BaP是否具有环境雌激素效应，本试验对罗非鱼OreochromisniloticusVtgmRNA进行研究，用总RNA提取试剂盒提取得到雌鱼肝脏总RNA，以转录得到的cDNA为模板，以Primer设计得到的引物，得到422bp的罗非鱼卵黄蛋白原特异性cDNA扩增片段；采用荧光定量PCR法检测10、50Pg-L的BaP暴露对罗非鱼肝脏Vtg基因表达的影响，结果发现4d、17d时雄性罗非鱼肝脏内VtgmRNA表达量与对照组无差异(P>0．05)，10d时10、50g

3、g·L2个剂量组VtgmRNA表达量显著高于对照组(P

4、n，MENGShunlong，QIULiping，JIAXushu，HUGengdong，CHENJiazhagn．VtgmRNAexpressioninliverofmaletilapia(Oreochromisniloticus)inducedbyBaP[J]．EcologyandEnvironmentalSciences，2013，22(11)：1837．1840．卵黄蛋白原(Vitellogenin，Vtg)是非哺乳类1．1主要试剂与仪器卵生动物卵黄蛋白的前体，鱼类的卵黄蛋白原通LrN1Q．10柱式总RN

5、A抽提试剂盒、即用PCR常由2个相对分子质量为150～220kDu的同源二扩增试剂盒、SanPrep柱式DNA胶回收试剂盒、聚体组成，在卵黄形成期，在雌激素刺激下VtgTris、溴化乙锭(EB)购自上海生工生物工程股份有肝脏合成，通过血液运输到发育的卵巢中，被有限公司；PrimeScript~RTreagentKit(PerfectReal卵巢所吸收。Vtg是雌鱼特异性蛋白，雄性和未成Time)、SVBR~PremixExTaqTMII(PerfectReal熟动物体内不存在或只有微量存在，但在雌激素Time)购

6、自宝生物工程有限公司；三氯甲烷、乙醇、诱导作用下，雄鱼和幼鱼体内也能合成和分泌异丙醇、Na2EDTA、冰醋酸等均为国产分析纯试剂。Vtg，因此Vtg是筛选和检测环境雌激素的理想的PRO200组织匀浆器；Sigma2．16k高速冷冻离生物标志物。在雌激素刺激下，VtgmRNA先于心机；XW-80A旋涡混合器(上海青浦沪西仪器厂)；Vtg在鱼体内表达，因此VtgmRNA也是研究雌BGPower600通用电泳仪(北京百晶生物技术有激素效应的良好标志物。限公司)；化学发光凝胶成像系统(UVP)；核酸蛋苯并(a)芘(Ben

7、zo(a)pyrene，BaP)是一种五环白分析仪(JenwayGenova)；基因扩增仪(BIOER)；芳烃，随着人类活动的增加，BaP不断被排放到水LX一200迷你离心机(海门其林贝尔仪器制造有限公体中，造成我国部分水体BaP污染严重，可能会对司)；LineGene9600荧光定量PCR检测系统水生生态系统和人类健康产生影响。目前的研究表(RIOER)；恒温水浴锅等。明BaP具有致癌、致畸、致突变作用，但在BaP是1．2试验动物及试验用水否具有环境雌激素效应方面的研究还比较少。本试试验用罗非鱼购自中国水产科学

8、研究院淡水验以罗非鱼Oreochromisniloticus为试验动物，研渔业研究中心南泉养殖基地，平均体长(17．25~1．25)究不同浓度BaP暴露下，雄性罗非鱼肝脏Vtgcm，体质量(65．3~3．2)g。试验用水为曝气一周的自mRNA的表达情况，为分析和评价BaP的环境雌激来水，水温(24~10℃，pH6．85～7．05，总硬度7．85～素效应提供科学依据。8．1