钩端螺旋体外膜脂蛋白lipl32的克隆 表达及其在钩端螺旋体抗体检测中的应用

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1、主要英文缩写主要英文缩写词表英文缩写英文全称中文AmpAmpicillin氨苄青霉素KnKanamyein卡那霉素PCRPolymerasechainreaction多聚酶链反应DNADeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸dNTPDeoxyribonucleosidetriphosphate脱氧核苷三磷酸ELISAEnzyme～linkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附试验E．coliEscherichiacoli大肠杆菌LBLuria-BertanimediumLB培养基D

2、MSODimethylsulfoxide二甲基亚砜TEMEDN，N。N，N—teramethylethylenediamine四乙基乙二胺X—gal5-broma-4一chloro一3一indoly—a—D—galactoside5一溴一4一氯一3～哼』哚一a—DBCIP5-bromo—。4—‘chloro—。3indolylphosphate5-溴_4一氯一3_吲哚一磷酸toluidiumAPalkalinephosphatase碱性磷酸酶HRPHorseradishperoxidase辣根过氧化物酶PB

3、SPhosphatebufferedsolution磷酸盐缓冲液RNARibonucleicacid核糖核酸SDS-PAGESodiumdodecylsulfate—polyacryamidegel十二烷基硫酸钠一聚丙烯1ectroDhoresiS酰胺凝胶电泳EDTAEthylenediaminetetraceticacid乙二胺四乙酸IPTGisopropyl—B—D—thiogalactopyranoside异丙基硫代一B一半乳糖WBWesternblot蛋白印迹TriSHydroxymethylami

4、nomethans三羟甲基氨基甲烷kDagilodalton千道尔顿MATMicroscopicagglutinationtest显微镜凝集试验ORFOpenreadingframe开放阅读框bpBasepair碱基对学位论文原刨性声明和版权使用授权书学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的真实成果。除文中已注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本论文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完

5、全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名(手写)：型醚导师签名(手写)：丝星年』月卫日驷略年』月盟El学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权福建医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保

6、密的学位论文在解密后适用本授权书)瞩昔龆名浮手勤)互p丞导师签名(手写)：～一垒k虹^J．．一‘～筚中竺堑年上月里F1中文摘要钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL32的克隆、表达及其在钩端螺旋体抗体检测中的应用摘要钩端螺旋体病(简称钩体病)是由致病性钩端螺旋体(简称钩体)引起的一种人兽共患的自然疫源性疾病。钩体血清型别众多，临床表现多种多样。目前钩体病血清学的主要检测方法是国家标准即显微镜凝集试验(MAT)，需要培养各种血清型的钩体活菌，操作繁琐，安全性差且需要暗视野显微镜，无法在基层开展该项目的检测工作。钩体外膜

7、脂蛋白LipL32是各种致病性钩体中高度保守的抗原成份，可刺激机体产生中和抗体。因此该抗原有可能应用于抗体检测。本课题用PCR法扩增致病性钩端螺旋体黄疸出血群(56601株)LipL32蛋白的全长基因片段，与表达载体pET-30a(+)连接并在大肠杆菌BL2t(DE3)中表达重组蛋白，Westernblot鉴定免疫活性后用电洗脱法进行纯化。纯化后的LipL32重组蛋白用间接ELISA和夹一OELISA法对不同的人和动物血清进行检测，以MAT为参照标准进行比较。主要结果如下：1．纯化的重组蛋白用间接ELISA

8、和夹,OELISA法对致病性钩体15株标准菌株的兔免疫血清全部检出，对7株腐生性钩体菌株的兔免疫血清全部未检出，与MAT检测结果相符。表明该重组蛋白能区别腐生性和致病性钩体感染。进一步确证黄疸出血群(56601株)外膜脂蛋白LipL32基因在致病性钩体中高度保守。2．重组蛋白检测确诊钩体病人的9例急性期和恢复期双份血清标本，急性期9份血清，MAT有2份出现阳性，间接ELISA和夹心ELISA法分别可检出3份和2份