钙 磷对奶牛rtecs中stc-1mrna和蛋白表达的影响

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1、钙磷对奶牛RTECs中STC．1mRNA和蛋白表达的影响摘要奶牛钙磷代谢紊乱类疾病是奶牛主要疾病之一，此类疾病目前对奶牛养殖危害很大，严重影响奶牛场的经济效益。近年来国内外钙磷代谢紊乱类疾病的研究主要集中在甲状旁腺素(PTH)、活性维生素D、降钙素、胰岛素样生长因子(IGF．1)、骨钙素(oc)等方面。斯钙素(Stannioealcin，STC)是一种糖蛋白激素，最早在硬骨鱼体内发现，随后在人、小鼠等多种哺乳动物中发现STC的存在。目前已证实STC．1参与调节体内钙磷的稳态。因此本实验设计研究STC．1与奶牛钙磷代谢之间的

2、关系，以提供更多的奶牛钙磷代谢紊乱疾病方面的相关理论。本实验从以下三方面进行了研究：1．奶牛RTECs的培养采初生奶牛肾脏皮质做奶牛肾小管上皮细胞的原代培养及传代培养，并用免疫组化方法进行细胞鉴定。细胞鉴定结果显示所培养细胞为奶牛肾小管上皮细胞，且通过纯化和传代，得到稳定纯净的奶牛肾小管上皮细胞。2．钙、磷对奶牛RTECs中STC．1mRNA表达的影响参照细胞增殖曲线用对数生长期细胞添加钙、磷影响因子进行分组培养，钙、磷影响因子各分为对照组，100pmol／L、500pmol／L、1000lamol／L和5000}tmol

3、／L五个不同浓度。分别在6h、12h、24h、48h提取各组的总RNA，利用荧光定量PCR方法检测钙、磷对STC一1mRNA的影响。荧光定量PCR结果显示：在奶牛肾小管上皮细胞中，低浓度磷离子短时间影响为促进作用，而高浓度时对STC．1mRNA的影响都是极显著抑制作用；低浓度长时间影响下，磷离子对STC．1mRNA表达水平为抑制作用。而对于钙离子，过高浓度5000／amol／L处理时对STC．1mRNA的影响都是抑制作用；长时间48h钙离子处理时四组浓度对STC．1mRNA表达水平也都为抑制作用；12h和24h处理时，10

4、0I．tmol／L、500gmol／L和1000I-tmol／L浓度钙离子对STC．1mRNA表达水平有促进作用。3．钙、磷对奶牛RTECs中STC．1蛋白表达的影响同上把细胞分组培养，分别在6h、12h、24h、48h提取各组的总蛋白，利用Westernblotting方法检测钙、磷对STC一1蛋白表达的影响。通过Western．blotting方法检测STC-1蛋白表达结果表明：短时间处理低浓度磷离子对STC．1蛋白表达水平产生有促进作用；高浓度磷离子处理时，STC．1蛋白表达水平被抑制；磷离子长时间48h处理时，不论

5、是低浓度和高浓度都对STC．1蛋白表达水平产生抑制作用。华中农业大学201l届硕士研究生学位论文不同浓度钙离子分别在6h、12h、24h和48h对STC．1蛋白的影响结果大致相同，都是随着钙离子浓度的不断升高，STC-1蛋白表达量不断下降，且高浓度时STC．1蛋白表达量与对照组相比明显减少。关键词：奶牛、STC．1、钙磷代谢、肾小管上皮细胞Ⅱ钙磷对奶牛RTECs中STC．1mRNA和蛋白表达的影响AbstractCalciumandphosphorusmetabolismdiseasesisoneofthemajordis

6、easesofdairyCOW．Atpresent,suchdiseasesposesseriousthreattodak,yfarms，seriouslyaffectingtheeconomicbenefitsofdairyfarms．InOUrcountryandabroad,thestudiesofCalciumandphosphorusmetabolismdiseasesfocusedonparathyroidhormonefPTH)，vitaminD，calcitonin，insulin-likegrowthfa

7、ctor(IGF一1)，osteocalcin(OC)andSOoninrecentyears．Stanniocalcin(STC)，isaglycoproteinhormonefirstdiscoveredinbonyfish,andtheninthehuman,mouseandothermammals．IthasbeenconfirmedthatSTC-1involvedinregulatingcalciumandphosphorushomeostasis．Therefore，ourexperimentaldesign

8、focusedonresearchingtherelationshipbetweenSTC-1andcalcium／phosphorusmetabolism,toprovidemoretheoriesofcalciumandphosphorusmetabolismdiseases．Andtheexper