食源性诺如病毒疫情中pcr检测技术的运用探讨

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1、食源性诺如病毒疫情中PCR检测技术的运用探讨摘要：目的对1起由诺如病毒引起的学校聚集性急性胃肠炎疫情进行实验室调查分析。方法流行病学调查与实验室检测相结合，采集病例肛拭、粪便、食品、调味品、环境涂抹样、水样共40份样本，进行RT-PCR核酸检测及常规细菌学检测。结果6名学生、1名保健教师、3名食堂厨师的肛拭样和1个粪便样、1个食品中检出诺如病毒核酸阳性。结论RT-PCR检测技术能快速有效的检出肛拭、粪便、食物中的诺如病毒，从而为疫情的病因诊断提供科学依据。关键词：诺如病毒；PCR；食源性疾病；检测技术Abstract：ObjectiveAlaboratoryinv

2、estigationandanalysisofschooloutbreaksofacutegastroenteritiscausedbyNoroviruswasperformed.MethodsThemethodcombinedepidemiologicalinvestigationwithlaboratorytestingwasemployed.Atotalof40samplesincludinganalswabsandfecesofpatients；food；condiments；smearsamplesofenvironmentsamples；watersa

3、mpleswerecollectedandutilizedforRT-PCRdetectionandroutinebacteriologicaltesting.ResultsNorovirusnucleicacidweredetectedpositiveinanalswabsofsixstudents,ahealthcareteacher,threechefsandafecessample,afood.ConclusionNorovirusinanalswab,fecesandfoodcanbedetectedquicklyandeffectivelybyRT-P

4、CR.Keywords:Norovirus；PCR；Foodbornediseases；Detectiontechnology近年來，诺如病毒引起的急性胃肠炎暴发时有发生。诺如病毒可通过食物、水及人与人接触而使人感染发病，若在学校及幼儿园等集体单位发牛，则易引起群体性胃肠炎暴发。诺如病毒感染性腹泻以起病急、传播快、暴发多为特征，因该病的症状及其多在冬季流行率上升，故被称为〃胃肠道流感〃或〃冬季呕吐病〃［1］。本文针对2015年3月成都市成华区某小学发生的一起诺如病毒引起的聚集性急性胃肠炎，将相关实验室病原检测情况及技术探讨报告如下：1资料与方法1.1临床信息学生聚

5、集性病例的主要症状为呕吐、腹泻、腹痛、恶心,部分病例的血常规检测结果显示白细胞总数、屮性粒细胞率增高。1.2流行病学及卫生学调查患者均为在校学生及教师，冇在校共同进餐史，学校提供公用直饮水及生活用水。1.3样本采集及其来源根据流行病学信息，准备的采样物资包括病毒采样管（北京友康）、自配灭菌1%NaCl肉汤、灭菌盐水和肠道致病菌直划平板（Mac.HE、TCBS）o采集病例肛拭8份、粪便样1份、学校厨师肛拭8份、供餐食品留样5份、调味品4份、环境涂抹样16份及水样2份（见表1）。1.4实验室检测对采集的样本进行病毒学检测和食物中毒常规致病菌检测。用RT-PCR法检测诺

6、如病毒和轮状病毒核酸；采用RT-PCR和细菌培养法检测食物中毒常规致病菌：沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蜡样芽泡杆菌、致泻大肠埃希氏菌。1.4.1病毒检测样本处理肛拭和粪便样本无需前处理；对于食品样本，釆用无菌操作取适量（约5g）样本至病毒采样管内（若有体积较大的食材，则用灭菌剪刀剪碎后放入），充分振摇后，静置待用。1.4.2细菌DNA的提取及检测取样本盐水管上清液ImL,12000rpm离心5min后奔上清。沉淀加入灭菌水50uL,将其悬浮后100°C煮沸5min,12000rpm离心2min,取上清用于PCR反应。本实验采用达安生物科技有限

7、公司提供的沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蜡样芽抱杆菌、致泻大肠埃希氏菌核酸检测试剂盒，按说明书加入5uL核酸提収物，在ABiStep-oneplusPCR扩增仪依程序进行40次循环扩增,并检测。1.4.3病毒RNA的提取及检测选用天隆核酸提取试剂盒（磁珠法）（Ex-RNA/DNA病毒2.0）提取病毒RNA。取各样本上清液200uL,按说明书加入10uLProteinaseK,4uLAcrylCarrier,放入天隆NP968核酸提収仪依程序自动提取。RT-PCR采用达安牛物科技有限公司的A、B、C组轮状病毒核酸、诺如病毒核酸检测试剂盒，取核酸提

8、取物5uL