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1、单核苷酸多态性及其检测方法 中华检验医学杂志)""&年#"月第)$卷第#"期;?62DEB3FGH/，I:74FHJ)""&，K41)$，-49 #"・$"!・ ・国内外进展・ 单核苷酸多态性及其检测方法 彭翠英;廖端芳;张佳;陈琳玲;李凯 ;;人类基因组测序计划的完成，标志着人类已步入后基因组时代 ［#］ 分子杂交的影响；（&）利用碱基变异对核酸分子在电场中迁移速度的影响；（*）直接测定碱基变异对核酸分子量所造成的改变。 ，该时代以基因组中个体遗传差异的研究为重点。 而个体遗传差异最常见形式为单核
2、苷酸多态性（,-.），正是这些,-.的变异造成人类在身材、体形、肤色、对疾病的易感性、疾病表型和对药物治疗反应等诸多方面或多或少的差异。在众多导致人类疾病的基因突变、病原亚型及耐药基因突变中，单碱基突变占相当大的比例，其检测方法的探索一直是基因诊断研究中的重要课题，特别对已知突变的检 测，将是进行基础研究和临床基因诊断的重要手段之一［)］ 。 一、,-.概念及其研究现状 #9,-.概念：,-.是指由于转换、颠换、插入、缺失等原因，使不同个体在基因组，即可认为是较古老的,-.，而不是新近发生的个体突变事件。 )
3、9,-.分析的意义：在诸多基因变异中，,-.是研究基因遗传与变异时一种高效的量化标志。在人类基因组中大约有!"亿个碱基，,-.位点以百万的数量级存在，无论是将,-.作为快速扫描全基因组的物理标志，还是对全基因组与疾病相关或药物代谢相关的,-.进行选择性扫描，均需要使检测的,-.位点进一步从百万级的数量下降至数万或数千个。因此，应用,-.进行疾病相关性分析，只有通过对多基因疾病进行,-.连锁不平衡分析，才能加强疾病预防与治疗的针对性。将,-.分析用于疾病诊断，可快捷而准确地将基因诊断提高到单碱基水平。目前，常规检测,-.
4、技术已被广泛用于遗传药理学研究和促进遗传病诊断的普及领域 ［!］ 。 !9,-.分析的现状：与为数有限的蛋白质测序和 基金项目：国家自然科学基金资助项目（!"#$#"%&）；国家’$!资助计划项目（()""""*+’"*） 作者单位：&)#""#衡阳；南华大学细胞生物学与遗传学教研室；南华大学,-.研究所（廖端芳、张佳、陈琳玲、李凯） 通讯作者：廖端芳电子信箱：/01234564783219:48 万方数据 种类繁多的,-.分析方法，反映了,-.的研究在生物学和医学领域备受关注，然而任何一种方法均不可能
5、独立地满足后基因组时代对,-.分析的要求。因此，无论是找寻新的，还是确认已知,-.位点，传统的 二、,-.分析方法的选择原则 ,-.分析方法的选择原则取决于是找寻未知,-.，还是分析已知的,-.。对未知,-.的分析，现在主要通过测序完成。对已知,-.，需根据是对单一位点还是对多个位点分析和实验目的不同，而选用不同的分析方法。对大量,-.位点的分析方法，主要有!种，即寡核苷酸,-.分析芯片、单碱基延伸,-.芯片和多孔板技术，如使用’+孔板的适时聚合酶链式反应（.?@）的单碱基多态性分析方法。对单点的,-.分析可使用的
6、方法相对较多，大多数以单点或为数不多的,-.位点为目的的基础和临床研究，选择不需荧光探测的方法，一般即可满足分子药理学和基因诊断的要求。 三、几种,-.分析方法 ［&］ #9限制性内切酶片段长度多态性分析（@AB.）：此方法仅适用于分析位于限制性内切酶酶切位点的,-.。步骤为：在需分析的单碱基多态性的上下游设计)个引物，并用这对引物放大相关核酸片段，然后，对该核酸片段用限制性内切酶消化，分析等位基因是否含有内切酶位点，以得到不同长度的产物。最后，通过凝胶电泳对酶解产物进行分离。从凝胶电泳所示核酸片段长度即可得知该
7、片段是否被消化。若 .?@产物被完全消化或不被消化，则分别为不同基因型的纯合子；若仅部分产物被消化，则其基因型为杂合 片段颜色深浅代表产物的不同相子（图#）。 对数量；==，33：均为纯合子；=3：使用@AB.时需注意，为杂合子引物设计依据所需放大片段 图!; ,-.片段经.?@放大和的长度或消化以后的长度决被限制性内切酶消化后凝胶电泳定，相对高浓度的凝胶适宜 结果示意图 于分析长度较短的片段，相 对低浓度的凝胶则有利于分析长度比较长的片段；凝胶浓度一般在#>C)>之间。通过设计酶解产物为不同长度的
8、（彭翠英） ・Q52・中华检验医学杂志,552年45月第,Q卷第45期R+>? 此外，尽管对相关位点的限制性内切酶的活性进行严格的限制，但已有假阳性的出现与相关位点的限制性内切酶的活性无关的报道。 另外，!"#$还可分析一些没有酶切位点的%&$。即设%&$位点所在等位基因计引物近’(末端碱基与模板不配对， 中的某个可与引物
