益气活血法对脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡fasfasl信号转导通路与调控的分析

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1、中文摘要中文摘要研究目标通过缺血性中风文献综述，系统掌握中西医关于缺血性中风理论和临床研究进展，在此基础上提出缺血性中风“气虚血瘀”病机学说，使我们的研究工作有据可依，并尽可能立足于学科前沿。通过实验观察，系统研究中医益气活血法在不同层次、不同靶点、不同时段对缺血性中风的作用，并以缺血半暗带神经细胞凋亡Fas／FasL信号转导通路与调控研究为主要切入点，在分子生物学层次上阐明其作用机制及缺血性中风“气虚血瘀”病机实质，并拟立气虚血瘀证局灶性脑缺血再灌注模型客观化、定量化、规范化研究评定方法和多时点、多途径、多层次、多因素动态实验观察模式

2、。力求为临床合理运用益气活血法治疗缺血性中风，提高临床疗效，为开发中药新药提供更科学的理论与实验依据。主要研究思路由于缺血性脑损伤是一个复杂的、动态的、连续的过程，包含着多环节、多层次、多因素、多途径、多位点的综合作用。历代医家对中风病病因病机的认识，唐宋以前多以“内虚邪中”立论，唐宋以后，一些医家根据自己的临床经验，对外风入中理论提出异议，始有主火、主气、主痰、主虚诸论，且多以“内风”立论。导师王键教授秉承家学，经过长期临床观察和实验研究认为在缺血性中风形成过程中，虚损为其本，尤其以气虚为主，瘀血的形成是其结果。因此认为气虚血瘀为缺血

3、性中风病的主要病机特征之一。中药的治疗，主要是通过多层次、多途径、多靶点综合作用于多个病理环节，从整体上改善和保护脑缺血损伤。本课题基于缺血半暗带病理生理特征，以脑缺血神经细胞凋亡为切入点，采用多因素病证结合的动物模型，主要在分子生物学水平，研究具有益气活血功效的中药复方制剂脑络欣通对脑缺血神经细胞凋亡Fas／FasL信号转导通路与调控的动态影响。主要研究方法宏观研究方法是：对大鼠存活率、体重、神经缺损体征、气虚证、血瘀证体征的观察。微观研究方法是：对模型鼠血浆及脑组织cAMP、cGMP含量、脑组织含水量、HE、Thionine神经细胞

4、硫堇染色、Mallory星形胶质细胞染色、Marchalls小胶质细胞染色、免疫组化染色、原位杂交检测。动态研究方法是：采用饥饿、劳累、高脂饮食等多因素复合制作出气虚血瘀证模型，然后用线栓法阻断大脑中动脉制作出局灶性脑缺血再灌注模型，脑缺血2h，分别再灌注id、3d、7d。随机分为假手术组、模型组、益气法组、活血法组，益气活血法组。宏观与微观相结合，治法、病证、方剂相联系，益气、活血、益气活血法相比较，定量研究和定性研究相结合，动态观察与静态观察相联系，从三个不同层次观察益气活血法对脑缺血再灌注损伤的保护作用和抗神经细胞凋亡作用及其机制

5、。数据处理方法是：采用MctamorphImagineSystem图像分析系统和SPSS11．0forWindows软件处理。主要实验结果1对各组鼠存活率的影响益气法组和益气活血法组鼠存活率明显高于同时段的模型组和活血法组；但各组问比较无显著意义。2对各组鼠体重的影响!垫墨堡垒生型堕壁垒要堕生查垦塑丝塑堕塑圭!!竺竺!堕里堡量望堕量塑丝!!!!至造模后，除假手术组外，各组体重均出现不同程度下降，与正常组相比较有显著差异；经治疗后，益气法组、活血法组和益气活血法组体重均有上升趋势，与同时段的模型组比较益气活血法组(7d)有显著性差异；治疗

6、组组间比较无显著性差异。3对各组鼠神经缺损体征的影响缺血再灌注6h各组实验动物偏瘫症状明显，治疗组与模型组比较无显著性差异；缺血再灌注24h后益气活血法组与模型组比较有显著性差异；缺血再灌注72h后，各治疗组与模型组比较均有显著性差异；治疗组组间比较，除活血法组24h外，均无显著性差异。4对各组鼠气虚证的影响经多因素复合造模后，各组气虚体征明显，各组间无明显差异；再灌注7d，益气法组、活血法组、益气活血法组气虚体征与模型组比较有显著改善；再灌注3d，且益气活血法组气虚体征与模型组比较有显著改善；治疗组组间比较无显著性差异，5对各组鼠血瘀

7、证的影响经多因素复合造模后，各治疗组血瘀体征明显，组间无明显差异；再灌注3d、7d，活血法组、益气活血法组对改善血瘀体征均有显著疗效，益气法组仅7d有显著疗效；治疗组组问比较无显著性差异。6对各组鼠脑组织含水量的影响经多因素复合制作病证模型的各组鼠脑组织含水量各时段均有所上升，与假手术组比较有显著差异；在脑缺血再灌注1d，各治疗组脑组织含水量均有所下降，但与模型组相比较，无显著差异；再灌注3d’益气法组、益气活血法组脑组织含水量均明显下降，与模型组相比较，有显著差异，而活血法组脑组织含水量未见明显下降，与模型组相比较，无显著差异；再灌注

8、7d，益气法组、活血法组和益气活血法组脑组织含水量均明显下降，与模型组相比较，有显著差异；治疗组组间比较，除活血法组3d外，均无显著性差异。7对各组鼠血浆与脑组织chMP和cGMP含量的影响经多因素复合制作