ncoa3对小鼠胚胎干细胞多能性调控的分析

《ncoa3对小鼠胚胎干细胞多能性调控的分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、摘要摘要胚胎干细胞(embryonicstemcells，ES细胞)是早期胚胎分离出来的一类细胞，它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。ES细胞能分化为机体几乎所有的细胞类型，因此具有巨大的基础研究及潜在的临床应用前景。有研究表明，Ras／MAPK信号通路可引起从胚胎干细胞到滋养层干细胞的分化，该调控是通过磷酸化级联反应起作用的。因此，我们运用磷酸化蛋白组学的方法检测诱导Ras过表达后蛋白质的磷酸化动态变化，试图发现信号转导过程中起关键作用的分子。最终，我们发现，Ncoa3对于维持胚胎干细胞的自我更新及其多潜能性有一定的作用。Ncoa3在

2、ES细胞中表达量较高，随着ES细胞的分化其表达量逐渐降低。通过shRNA干扰Ncoa3的表达可以使多能性相关基因Nanog、Oct4，Sox2的表达量降低，荧光素酶报告基因实验证明Ncoa3可调节Nanog的启动子的活性。染色体免疫共沉淀实验进一步证明，Ncoa3可直接作用于Nanog的启动子，影响Nanog启动子活性，影响其表达，从而影响胚胎干细胞的多能性。可见，Ncoa3对多能性有一定的作用。具体作用机制，有待于进一步研究。关键词：胚胎干细胞Ncoa3自我更新NanogAbstractAbstractEmbryonicstemcells(ESce

3、lls)arepluripotentstemcellsderivedfromearly—stageembryos．EScellsaleabletoself-renewindefinitelyandtodifferentiate．EScellscalldifferentiateintoalmostalltypesofcells．SoEScellhasgreatpotentialinbasicresearchandbrightapplicationprospectincellreplacementtherapy．Previousstudieshavepr

4、ovedthatRas-MAPKsignalingpathwayinducesthedifferentiationfromEScellstotrophectodermstemcell．ItiswellknownthatRas—MAPKpathwayfunctionsthroughproteinphosphorylationcascade．Sowetriedtoidentifydown-streamfactorsinRas·MAPKsignaltransductionbyphosphoproteomicstudies．Here，weidentified

5、Ncoa3asanovelfactorcrucialforthemaintenanceofpluripotencyinEScells．TheexpressionlevelofNcoa3waslli曲inEScells．Duringdifferentiation，Ncoa3expressionWasreduced．KnockdownofNcoa3expressionresultedindown—regulationofpluripomencymarkerNanog、Oct4andSox2，andinducedESeelldifferentiation．

6、Furthermore，luciferaseassayandchromatinimunoprecipitationprovedthatNeoa3actsontheNanogpromoter，andaffecttheexpressionlevel，SOastoregulatethepluripotencyofEScells．FurtherinvestigationarerequiredforbetterunderstandingofthemechanismofNeoa3inpluripotencymaintenance．Keywords：Embryon

7、icstemcell；Ncoa3；Self-renewal；NanogIl第一章引言第一章引言1．研究背景胚胎干细胞(embryonicstemceils，ES细胞)是由胚胎内细胞团或原始生殖细胞经体外抑制培养而筛选出的细胞，具有发育全能性，理论上可以诱导分化为机体中200多种细胞。自1981年Evans和Kaufman首次成功分离小鼠ES细胞，国内外研究人员已在仓鼠、大鼠、兔、猪、牛、绵羊、山羊、水貂、恒河猴、美洲长尾猴以及人类都分离获得了ES细胞。并且已经证明小鼠ES细胞可以分化为心肌细胞、造血细胞、卵黄囊细胞、骨髓细胞、平滑肌细胞、脂肪细胞、软

8、骨细胞、成骨细胞、内皮细胞、黑色素细胞、神经细胞、神经胶质细胞、少突胶质细胞、淋巴细胞、胰岛细胞、滋养层细胞