myct1在wnt信号通路及结肠癌发生中的作用分析

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1、浙江理工大学硕士学位论文MYCTl在Wnt信号通路及结肠癌发生中的作用研究摘要Wnt信号通路在胚胎发育、细胞增殖和分化过程中和肿瘤发生中起到极其重要的作用。研究表明：大约90％的肠道癌症是由于Wnt信号通路的异常激活引起的，另外有80％的结肠癌是因为APC基因的突变导致Writ信号通路的异常激活而导致的MYCTl(myetarget1)基因最初发现于喉癌细胞中，后因发现其启动子上有两个E-box即c-MYC结合位点，故命名为myetarget1．孙开来等人研究发现MYCTl的表达量在喉癌、肝癌等癌症组织中低于相应癌旁组织。MYCTl过表达还能抑制癌细胞的生长，国

2、内研究人员将MYCTl定义为一种抑癌基因。国外研究人员对鼠源的MYCTl蛋白进行研究发现，MYCTl蛋白在许多方面能起到替代MYC蛋白的作用。其功能之强大得到了众多科学家的肯定。在本研究课题中，我们利用携带有MYCTlshRNA的非复制型腺病毒对MYCTl在wm信号通路及结肠癌发生中的作用进行研究。研究结果表明，MYCTl蛋白能够通过同fl-eatenin和TCF．4相结合的方式调控Writ信号通路，并且在SW480的裸鼠皮下结肠癌模型中的实验中，MYCTl在结肠癌的发生及生长中起到了重要的作用。【实验方法】本实验室利用Adeasy系统成功构建出携带有靶向MYC

3、TlmRNA的非复制型腺病毒，命名为ad．shMYCTl；另外构建一对应非复制型腺病毒ad．shGPF作为对照病毒。构建好的病毒经鉴定正确后，通过在HEK293细胞中扩增，并运用CsCl密度梯度离心纯化得到高低度的病毒。纯化后的病毒运用TCID50法在HEK293中测出其滴度后方可用于实验；运用Westernblotting、RT-qPCR和luciferasereporter实验检澳,Oad—shMYCTl对Writ下游基因转录激活的影响；免疫共沉淀实验被运用于检测MYCTl蛋白相互作用的蛋白；运用裸鼠成瘤实验和免疫组化实验研究MYCTl在结肠癌发生及生长中的

4、作用。【实验结果】体外实验结果表明，ad．shMYCTl能够下调Wnt下游基因的mRNA和蛋白表达水平，并能够显著抑带0TCF．4转录调控的活性。免疫共沉淀实验表明MYCTl可能依靠与D．Catenin和TCF．4相结合的方式参与Wnt信号通路的调节。体内实验证明，ad．shMYCTl对SW480荷II浙江理工大学硕士学位论文瘤具有良好的治疗效果：实验组裸鼠接受ad．shMYCTl治疗后肿瘤生长受到明显抑制，而注射-j'PBS或者ad-shGPF后对照组裸鼠肿瘤生长迅速；实验组裸鼠的生存时间也明显比对照组裸鼠的要长。免疫组化实验的结果也证明ad．shMYCTl能

5、够下调结肠癌标志物CD44的表达。【结论】本文通过在BJ5183感受态细菌中重组、HEK293细胞中包装产生腺病毒的方法成功得到了不含野生型腺病毒污染的携带有MYCTlshRNA和GFPshRNA的非复制型腺病毒。实验结果表明：运用ad．shMYCTl下调MYCTl表达能够显著抑制Wnt信号通路的激活，并抑制结肠癌的生长。MYCTl能够作为基因病毒治疗结肠癌一个新的靶点。关键词：Myetarget1，腺病毒，Wnt，结肠癌III浙江理工大学硕士学位论文ThefunctionofMYCTlintheWntsignalingpathwayandcolorectalt

6、umorigenesisAbstractTheWritsignalingpathwayplaysallimportantroleinembryogenesis，proliferationandtumorigenesis．It’Sreportedthat90％ofcolorectalcancersdevelopbecauseofderegulationoftheWntsignalingpathwayand80％ofcolorectalcancersdevelopresultfromAPCmutant．derivedWutactivation．MYCT／(Mycta

7、rget1)wasfirstfoundinthroatcancercells，thencalledmyctarget1，becausetherearetwoE-boxelementsforc-MYCbingding．SunKailaiaandotherresearchersreportedthattheexpressionofMYCTlwaslowerinthroatandlivercancerthanthatinthenormaltissuenexttotunlortissues．MYCT／overexpressionwasreportedtoinhibitt

8、hegrowthofca