流行性乙型脑炎病毒单克隆抗体的制备与

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1、密级：论文编号：中国农业科学院学位论文流行性乙型脑炎病毒单克隆抗体的制备与prM．E蛋白抗原捕获ELISA检测方法的建立DevelopmentofMonoclonalAntibodiesAgainstJapaneseEncephalitisVirusandEstablishmentofAntigenCaptureELISAforprM—EProteinDetection硕士研究生：王晓磊指导教师：华荣虹副研究员申请学位类别：农学硕士专业：预防兽医学研究方向：兽医微生物及其分子生物学培养单位：中国农业科学院研究生院哈尔滨兽医研究所2015年5月万方数据删舢舢舢舢舢舢舢删Y

2、278751§Secrecy：No．ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationDevelopmentofMonoclonalAntibodiesAgainstJapaneseEncephalitisVirusandEstablishmentofAntigenCaptureELISAforprM-EProteinDetectionM．S．Candidate：WangXiaoleiSupervisor：AssociateProf．HuaRonghongMajor：PreventiveVeterinaryMedicineS

3、pecialty：VeterinaryMicrobiologyandmolecularbiologyMay2015万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：王国醵彰时问：纠}年‘月岁品关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业

4、科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：王魂磊时间：v依年6其∑R铷张筠礞饥时间：≯a,J-年角r曰万方数据中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目流行性乙型脑炎病毒单克隆抗体的制备与prM—E蛋白抗原捕获ELISA检测方法的建立兽医微生物及论文作者王晓磊专业预防兽医学研究方向其分子生物学指导教师华荣虹培养单位(研究所)哈尔滨兽医研究所硕(博)姓名职称导师单位专业签名评孙继国教授硕导口河北

5、农业大学预防兽医学‘＼＼博导囹阅副研究硕导囹中国农业科学院上海‘＼＼人王权员博导口兽医研究所预防兽医学答辩硕导口主李一经教授博导囹东北农业大学预防兽医学害／陆席华育平教授硕导口东北林业大学预防兽医学惭涂长春研究员硕导口军事医学科学院预防兽医学撇博导囱答硕导口蒯l彬博导囹军事兽医研究所师东方教授东北农业大学预防兽医学博导囹辩硕导口中国农业科学院哈尔孔宪刚研究员预防兽医学博导囹滨兽医研究所委硕导口中国农业科学院哈尔预防兽医学哆嫱步志高研究员员博导囤滨兽医研究所硕导口中国农业科学院哈尔吴东来研究员博导囤滨兽医研究所预防兽医学准嘻絮硕导口中国农业科学院哈尔刘长明研究员博导囹滨兽

6、医研究所预防兽医学汕硼’＼会议记录(秘书)张敏敏j论文答辩时间地点2015年5月29日。哈尔滨兽医研究所主楼317万方数据摘要流行性乙型脑炎(Japaneseencephalitis，JE)是一种危害严重的蚊媒性人兽共患传染病，广泛流行于亚洲大部分地区和西太平洋地区，近年来，在澳大利亚北部和巴基斯坦的传播表明该病的流行范围在不断扩大。JEV不仅严重威胁人类的健康，而且会对养猪业造成巨大的经济损失。建立以单克隆抗体为基础的抗原抗体检测方法则是预防控制该病毒病的重要手段。本课题组已经构建了稳定表达JEVprM-E蛋白的哺乳动物细胞系，该细胞系表达的prM蛋白和E蛋白能够组装

7、成与JEV病毒粒子具有近似构象结构的病毒样颗粒(VLP)并分泌至细胞培养液中。本研究将该细胞系表达的JEV-VLP纯化后作为免疫原，免疫6～8周龄BALB／c雌鼠，经淋巴细胞杂交瘤融合技术、亚克隆和间接ELISA方法进行筛选后，获得了8株能稳定分泌JEVprM．E蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为185、3A7、4C6、5810、5E7、11C2、12D10、18A7。间接ELISA检测结果表明杂交瘤细胞培养上清的抗体效价介于l：64—1：2048之间，腹水的抗体效价介于l：51200～l：204800之间。以HBT试剂盒对单