细菌混合培养对细菌耐药性的影响

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1、细菌混合培养对细菌耐药性的影响李柳冰于佳孙雪奚庆（天津医科大学300203）【摘要】近年来，耐药性细菌的种类越来越多，其耐药范围越来越广，临床上关于细菌的培养方式对细菌耐药性的变化是否存在影响的研究，对临床上指导用药物治疗耐药性细菌有重要的意义。木文通过在肉汤培养基中混合培养大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌，经纸片扩散法药敏试验观察细菌耐药性的前后变化，以了解混合培养对细菌耐药性是否存在影响。实验结果表明，细菌混合培养对细菌耐药性有一定的作用。木文还结合其他研究,对细菌耐药性变化的原因进行初步探讨。【关键词】细菌混合培养细菌耐药性质粒传递【中图分类号】R37【文献标识码】A【文章编号

2、】2095-1752（2013）18-0135-01引言纸片扩散法药敏试验是观察细菌对某种药物是否敏感的有效方法，故可用纸片扩散法药敏试验测试细菌对某种药物耐药性的前后变化。首先需要找出两种细菌，它们对某一特定药物分别显示为敏感和耐药，经过实验得出，大肠埃希蘭对新生霉素耐药，金黄色葡萄球菌对新生霉素敏感。然后，将两种细菌放到肉汤培养基当中混合培养，观察原来对新生霉素敏感的金黄色葡萄球菌耐药性是否发生变化，以得到混合培养是否对细菌耐药性产生一定的影响的结论。随后，查阅相关资料，探讨细菌对药物耐药性变化的可能原因。一、材料和方法1.1材料1.1.1菌种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、各

3、自18-24h培养物。1.1.2培养基普通琼脂平板、血琼脂平板、肉汤培养基。1.1.3器材药敏纸片（新生霉素）、接种环、试管、移液管、吸耳球、恒温培养箱、酒精灯、无菌棉签、镊子、打火机、记号笔。1.2方法1.2.1用2支无菌棉签分别沾取人肠埃希菌和金黄色葡萄球菌均匀密涂于两个普通琼脂平板上，并用镊子夹取2片新生霉素药敏纸片分别放于平板中央，镊子夹纸片前应烧灼火菌，轻压纸片确保纸片贴牢，将平板倒扣放置于35°C恒温箱内18h左右。1.2.2将接种环火焰火菌，待冷后分别挑取金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌少许，先在接近液面的肉汤培养基试管壁上研磨并沾取少许肉汤培养基与之调和，使细菌均匀分

4、布于培养基中，管口火菌后加塞，标记，放入35°C恒温箱培养18〜24h，观察结果。1.2.3分别用移液管吸取大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌0.1ml放于冋一肉汤培养基中，管口灭菌后加塞，标记，放入35"C恒温箱培养18〜24h，观察结果。1.2.4将接种环火焰火菌，待冷后沾取少许大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的培养物涂于血平板做分区划线，标记，放入35"C恒温箱培养18〜24h,观察结果。1.2.5用无菌棉签沾取血平板上单一的金黄色葡萄球菌，均匀密涂于普通琼脂平板上，并用镊子夹取1片新生霉素药敏纸片放于平板中央，镊子夹纸片前应烧灼火菌，轻压纸片确保纸片贴牢，将平板倒扣放置于35°C恒温

5、箱内18h左右。二、结果2.1实验步骤1观察到金黄色葡萄球菌对新生霉素敏感,大肠埃希菌对新生霉素耐药。2.2实验结束后观察到金黄色葡萄球菌对新生霉素的耐药性由原来的敏感变为耐药。2.3从本实验可以得出，细菌混合培养对细菌耐药性的变化奋一定程度的影响作用。三、讨论0前，细菌耐药性的产生，导致了临床治疗失败，增加了死亡的危险性，对人类健康构成了威胁。为此细菌耐药性已成为了世界范围内广泛注意的焦点,各国均呼吁加强细菌耐药性方面的研宄预防，WHO及其伙伴，还专门就此召开了紧急会议，要求全球范围内进行耐药监测，以评估、预防和控制耐药细菌的出现和传播。细菌耐药性是指细菌对于抗菌药物作用的耐

6、受性，耐药性•一旦产生,药物的化疗作用就明显下降，所以研究细菌的耐药性变化奋重要的临床意义。控制细菌耐药性的传播，奋助于建立一个更为良好的医疗卫生环境。查阅到的相关资料显示，自然状态下细菌基因转移和重组的主要方式冇转化、转导、接合、转换这四种，耐药性基因可以通过前三种方式传播，其中，转化是将外源DNA分子引入受体细胞，使之获得新的遗传性状的一种重要手段，是耐药性基因在不冋种属细菌间传播耐药性的重要方式。本实验通过人肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的混合培养，使部分原来对新生霉素敏感的金黄色葡萄球菌耐药性发生变化，转变为对新生霉素耐药。K耐药性机制很可能是大肠埃希菌将K•本身的耐药性质粒

7、传递给敏感的金黄色葡萄球菌从而使得金黄色葡萄球菌获得耐药性。进一步探讨金黄色葡萄球菌获得耐药性的机制，由于耐药性根据K发生原因可分为获得耐药性和天然耐药性，故尚不能排除耐新生霉素的金黄色葡萄球菌，是在新生霉素存在的环境中，选择出来的自然耐药性突变株；也不能排除新生霉素敏感性的金黄色葡萄球菌摄取了大肠埃希菌耐新生霉素的DNA后，在金黄色葡萄球菌体内又重新发生了整合，而并非大肠埃希菌耐药性质粒在金黄色葡萄球菌体内的自主复制表达。故本实验并不能确切证明细菌混合培养对细菌耐药性的影响是由于耐药性质粒