以hiv1复制和cxcr4 ccr5启动子为靶点的抗hivaids药物筛选系统的建立及应用

《以hiv1复制和cxcr4 ccr5启动子为靶点的抗hivaids药物筛选系统的建立及应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、——一——]fIlUJlIIrrllflrlflIIfrllllfllfIlllll1fllrJlllll【Y1930837原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的

2、复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。‘学位论文作者：日期：年月日CXCR4、CCR5启动子为靶点的抗S药物筛选系统的建立及应用摘要背景与目的获得性免疫缺陷综合征(AcquiredImmureDeficiencySyndrome，AIDS)flp艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirus，HIV

3、)感染，攻击人类免疫系统，破坏人体CD4+T淋巴细胞而引起的一种严重免疫缺陷性疾病。艾滋病在全球蔓延的速度令人震惊，我国HIV／AIDS感染者也在迅猛增加。尽管联合高效抗逆转录病毒疗法(hightlyactiveantiretroviraltherapy，HAART)在治疗艾滋病上已经取得了明显进展，但是，由于其治疗费用昂贵而无法广泛地应用到发展中国家，并且毒副作用和多种耐药株报道已屡见不鲜。为此，开发和使用低毒、高效、可长期使用的中草药或者其他廉价药物治疗艾滋病已经刻不容缓。中药是我国特有的药物资源，在传统中医药的理论研究与应用方面有着坚实的基础。中医药治疗艾滋病具有药源丰富、价格

4、低廉、毒副作用小，作用持久等特点，在抗AIDS的研究得到普遍重视。因此，在极其丰富的中药资源宝库库中，如何筛选出抗HIV／AIDS病毒药物，仍然是急需解决的急迫问题。分析HIV基因结构：HIV基因组由两个拷贝的正链单股RNA组成，全长约9．7kb，含有gag、pol、env三个结构基因，以及tat、rev、nef,vii',vpr、vpu等调控基因。在基因组的5’端和3’端各含长末端重复序歹JJ(10ngterminalrepeat，LTR)，其中LTR5’端中含有HIV基因调控所必需的多个特定调控区，是一组真郑州大学2010届博士学位论文中文摘要核增强子和启动子(Promoter)

5、序列。启动子对HIV病毒的复制起着关键作用，如果能够抑制启动子的活性就可以阻止HIV病毒复制。本课题应用了一种以HW-1复制为靶标，可以在细胞水平应用于常规实验室的安全药物筛选载体(pNL4．3LucR'E。)。该载体的特点是：含有HIV-1的核心基因，敲除了HIV-1基因组中env、vpr和nef基因，可在常规实验室操作。并且，该载体在nef基因的位置引入报告基因(荧光素酶基因)，通过测定报告基因的表达可以反映HIV-I的复制水平，因此，可以此作为评价药物效果的重要指标。从HⅣ病毒攻击靶细胞的机制分析：CD4分子是HIV进入靶细胞的主要受体，但是仅有CD4尚不足以使HⅣ病毒侵入细胞

6、，还必须有辅助受体与CD4分子的协同作用，HIV才能进入宿主细胞。CXCR4(CXC-chemokinereceptor4)和CCR5(CC．chemokinereceptor5)是HIV感染宿主细胞主要辅助受体，它们主要分布在机体免疫细胞表面，属于趋化因子家族，是G蛋白偶联的膜受体。CXCR4启动T细胞嗜性(T-tropic)的HIV．1病毒株感染宿主细胞，CCR5则允许M嗜性(M-tropic)的HIV．1病毒株感染宿主细胞。由于在HIV病毒感染的无症状期和血清抗体刚刚转阳所分离出的病毒株主要是M-tropic毒株，利用CCR5在病毒传播过程中起作用，所以，CCR5主要在病毒感染

7、的早期阶段起重要作用。CXCR4则通过T细胞嗜性病毒株在艾滋病感染的晚期起作用。在HIV病毒感染宿主细胞过程中，先是病毒表面的糖蛋白gpl20与细胞表面受体蛋白CD4结合，使其吸附在宿主细胞上，gpl20再与宿主细胞表面辅助受体CXCR4／CCR5相互作用，使病毒迸一步接近宿主细胞，随后病毒表面的跨膜蛋白gp41发生构象变化，插入靶细胞膜中，导致病毒包膜与宿主细胞膜的融合，HIV病毒RNA进入细胞。因此，以辅助受体为靶点进行抗HIV研究是近年来研究的热点。