手性药物高效液相色谱拆分方法研究进展

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1、手性药物高效液相色谱拆分方法研究进展李亚捷(江川县人民医院云南江川652600)【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)31-0119-02【摘要】自然界很多药物是手性药物，手性药物的开发已成为制药领域的必然趋势，其分析测定方法也得到快速发展。高效液相色谱法作为经典实用的分析测定方法，得到了广泛的运用。本文综合国内外文献，综述了手性药物高效液相色谱拆分方法研究进展，为手性药物的含量测定和牛物分析提供思路。【关键词】手性药物高效液相色谱法拆分手性是自然界的木质属性之一，作为生命活动重要基础的生物大分子和许多作用于受体的活性物质均具

2、有手性特征。对手性药物而言，两个对映体并非具有相同的药效。HPLC分离药物对映体可分为间接法和直接法，前者乂称为手性试剂衍牛化(CDR)法，后者可分为手性流动相添加剂(CMPA)法和手性固定相(CSP)法。CDR法是将不对称中心引入分子内，而CMPA法和CSP法则是将不对称中心引入分子间。1CDR法CDR法是将药物对映体先与高光学纯度衍牛化试剂(CDR)反应形成非对映异构体，再进行色谱分离测定，适用于不宜直接拆分的样品。该法的优点是衍牛化后可用通用的非手性柱分离，无需使用价格昂贵的手性柱，而且可选择衍生化试剂引入发色团提高检测灵敏度。金银秀等⑴釆用手性衍牛化试剂GIT

3、C对美西律进行柱前手性衍牛化，建立了美西律对映体在人血清白蛋白中的测定方法。2CMPA法CMPA法是将手性选择剂添加到流动相中，利用手性选择剂与药物消旋体中各对映体结合的稳定常数不同，以及药物与结合物在固定相上分配的差异,实现对映体的分离。此法的优点在于：不需对样品进行衍生化，可采用普通的色谱柱，手性添加剂可流出，也可更换，同时添加物的可变范围较宽，使用比较方便。目前常用的手性流动相添加剂有：环糊精(CD)及其衍生物、配位基手性选择剂、手性离子对添加剂、蛋白质、大分子抗生素。2.1配体交换型手性添加剂此类添加剂多为氨基酸及其衍生物与二价金属离子铜、锌、鎳等结合,以适当

4、浓度分布于流动相中，然后外消旋体共同形成非对映的配位络合物进行拆分。2.2环糊精添加剂常用的环糊精主要为P-CD,P-CD络合的化学计量关系通常为b1,但是其它比例也存在，在添加CD的RP色谱中，存在两个平衡流动相中游离溶质和CD络合物在固定相上的吸附平衡，其影响因素包括有机溶剂的用量及酸度等。如杨青等［2］以C18为分析柱，将B・CD、2,6•二甲基3-CD.2,3,6■三甲基B-CD分别作为手性流动相添加剂，系统地研究了酮基布洛芬对映体在HPLC系统中的拆分。2.3手性离子对添加剂此方法为对映体与手性离子对试剂形成非对映离子对，利用其在固定相和流动相之间不同的分配

5、比来分离，手性离子对必须具有3点作用模式。3CSP法手性固定相(CSP)是由具有光学活性的单体固定在硅胶或其它聚合物上制成的，在拆分中CSP直接与对映体相互作用，而其中一个生成具有不稳定的短暂的对映体复合物，造成在色谱柱内保留吋间的不同，从而达到分离的目的。3.1天然高分子手性固定相这种固定相主要有蛋白质类、环糊精类、多糖及其衍生物类、冠醯等。其中，以环糊精类目前应用较多，同吋CD分子上的手性中心也能选择性地与对映体作用。目前，以P-CD应用最多。不同的环糊精的空腔大小不同，—CD适于分离小分子药物对映体，Y・CD适于分离大分子药物，P-CD对形成包合物有最佳大小的空

6、腔，适用于大多数对映体的位阻和电子特征，如酮咯酸氨丁三醇盐对映体，佐匹克隆对映体，蔡普生乙酯对映体的分离［3］。冠联具有亲水性内腔和亲脂性外壳，可键合在硅胶或聚苯乙烯基质上制成手性固定相。根据主一客化学原理，用于含有能够质子化的伯胺功能团的药物对映体的分离，将(+)-18-冠瞇-6-2,341,12-四竣酸键合至氨基丙基硅胶上作手性固定相，不仅可以分离具有伯氨基的药物对映体，如肌肉松弛药物氟隆酮、抗疟药伯氟隆等。3.1.1合成高分了固定相主要包括聚丙烯瞅胺、聚甲基丙烯酸醋等含光学活性中心的高分子物质。运用较多的是交联聚駄胺，其分离机理--般认为是对映体与高分子聚合物本

7、身的手性空间结合，同时还受到聚合物分子量，溶剂pH值等因素的影响。3.1.2氨基酸型手性固定相该固定相是以硅胶为起始原料，硅烷化成梭基型键合物，最后与有光学活性的氨基酸反应制得。其机理是对映体与固定相的氢键形成不同的非对映体络合物而分离。适于分离Q■氨基酸衍生物、Q■氨基坯基磷酸衍生物、二肽等，缺点是价格较贵。3.2配体交换型固定相该固定相是以某种聚合物，如交联的氯甲基苯乙烯与手性氨基酸结合而成，同吋，还需过渡金属离子的参与，如Cu2+等。被拆分物质通过金属络合物与固定相上的配位基发生配体交换，络合在固定相上。由于这种络合是可逆的，因此这种方法的分离