ugt1a1 5侧翼区多态的研究——从分子生物学功能到与冠心病的关联

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1、复旦大学博士学位论文UGT1A15'侧翼区多态的研究－－从分子生物学功能到与冠心病的关联姓名：张骏申请学位级别：博士专业：遗传学指导教师：金力；卢大儒；金建中20071020复旦大学博士学位论文摘要目的：研究UGTIAl5’侧翼区的多态叫TA)n短串联重复多态(．53(TA)5．8)和．364C>T与．3279T>G两个单核苷酸多态的分子生物学功能，包括对基因5’侧翼区的转录活性的影响和对转录因子结合能力的影响。在分子生物学功能研究的基础上，进一步研究多态与冠心病的关联。方法：多态对UGTIAl5’侧翼区转录活性的影响用双萤光素酶报告基因法

2、检测。与多态结合的转录因子及多态对转录因子结合能力的影响均用酵母单杂交法进行筛选或检测。多态与冠心病的关联分析则在一个病例．对照样本中进行，该样本采自国家人类基因组南方研究中心和复旦大学共同建立的冠心病队列。结果：我们发现(TA)n多态对UGTIAl5’侧翼区转录活性有显著的影响(P=6．57×10‘4)，并且(TA)n不同等位基因型对筛选到的转录因子的结合能力也存在明显的差异。我们没有在(TA)n多态与冠心病之间直接检测出相关性(P=0．481)，但是通过引入中间表型胆红素水平，我们发现(TA)n多态与胆红素水平及胆红素水平与冠心病之间都

3、显著相关(P值分别等于4．49×104和7．97×104)，该结果间接的提示Y'(TA)n多态与冠心病之间的关联，而未直接检测出相关性可能是直接检验的统计效力不足所致。我们发现．364C>T对转录活性无影响(P=O．573)，但却与胆红素水平显著相关(P=2．19x10弓)。．364C>T与(TA)n多态的连锁不平衡分析则提示．364C>T与胆红素水平的关联与．364C>T与(TA)n多态之间较强的连锁不平衡(r2=0．786)有关。我们发现．3279T>G对转录活性的作用没有(TA)n多态那样显著(P=0．069)，并且．3279T>G不

4、同等位基因型对筛选到的转录因子的结合能力也不存在明显差异，又由于．3279T>G与(TA)n多态的连锁不平衡较弱(r2=0．228)，因此我们没有检测出．3279T>G与胆红素水平和冠心病的相关性。结论：UGTlAl5’侧翼区多态的分子生物学功能和疾病关联研究显示，具有分子生物学功能的(TA)n多态与胆红素水平和冠心病相关，无分子生物学功能的．364C>T因与(TA)n多态的较强连锁不平衡而显现出与胆红素水平的相关性，而分子生物学功能较弱的．3279T>G则与胆红素水平和冠心病无关。关键词：UGTIAl、胆红素、冠心病、双萤光素酶报告基因检

5、测、酵母单杂交、关联分析、中间表型、连锁不平衡中图分类号：Q78、Q3481复旦大学博士学位论文AbstractObjectives：Theaimofthisstudyistoinvestigatethemoleculareffects，includingtranscriptionaleffectsandbindingabilit)，totranscriptionalfactors，ofthreevariants，(TA)nshorttandemrepeatpolymorphism(-53(TA)5—8)andtwosinglenucleo

6、tidepolymorphismsat·-364site(-364C>T)and—·3279site(-3279T>G)inthe5'-flankingregionofUGTIAlandfurtherstudytheirassociationwithcoronaryheandisease．Methods：Thetranscriptionaleffectsweremeasuredbydual—luciferaserepoaerassay．Transcriptionalfactorsboundtothepolymorphicsitesweres

7、creenedbyyeastone—hybridandalsothemeasureoftheirbindingability．TheassociationbetweenthevariantsandcoronaryheartdiseaseWasstudiedinacase—controlsamplecollectedfromacoronaryheartdiseasecohortbyChineseNationalHumanGenomeCenteratShanghaiandFudanUniversity．Results：Wefoundthat(T

8、A)npolymorphismhadsignificanttranscriptionaleffect(P=6．57×10—4)and(TA)nalleleshaddifferen