rna沉默hif1α对nb4急性早幼粒细胞生物学行为的影响

《rna沉默hif1α对nb4急性早幼粒细胞生物学行为的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝姿盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。撇姗虢词司匕槲帅，6年∥月／日￥学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝鎏盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝姿盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等

2、复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)一虢同同等导师签名：签字日期：印c己年Z月／日签字日期：dJtk6月／日万方数据浙江大学硕士学位论文致谢岁月如梭，攻读在职硕士研究生的学习生涯即将结束，一路走来，有付出也有收获!美丽的夏季，是收获的季节。此时的我也将为自己近几年的辛勤付出带来些许收获。读研期间，一直奔波于杭州和绍兴之间，在教室里认真聆听教授们的授课，开拓了知识的视野；实验室里，不断探索每一个实验细节。学习上孜孜以求，科研上全力以赴。成绩的最终取得，是所有家人、导师、朋友和同事共同努力的结果。经历了读研中的所有困难和挫折，使我能更清晰认识自己，了解自己，学会

3、更多踏实做人和严谨治学的道理。首先我要感谢我的导师陶志华教授，感谢他这几年来对我的包容和肯定，也感谢他对我的辛勤指导、谆谆教诲和热心关怀。导师学识渊博、专业精湛和实事求是的科研作风，并为我提供了良好的学习和科研环境，是我一直学习的榜样。其次要感谢浙江大学医学院附属第二医院检验科老师们的帮助，同时要感谢绍兴市人民医院临床检验中心吴云路、倪晓妍、吕娟等同事的帮助，感谢你们在我学习和生活上一路走来的陪伴和帮助。在此我还要特别感谢我的父母、爱人和女儿，感谢你们一直以来对我的理解和包容，你们无私的付出和坚定的支持，是支持我不断前行的动力。最后，我要感谢答辩委员会的各位专家，给了我一个审视学习成果的

4、机会，让我能够明确今后的发展方向，您们对我的帮助将是一笔无价的宝贵财富!本课题得到绍兴市科技计划项目[2012870051]资助。万方数据浙江大学硕士学位论文中文摘要RNA沉默HIF．1a对NB4急性早幼粒细胞生物学行为的影响浙江大学医学院临床检验诊断学硕士研究生周国忠导师陶志华教授中文摘要目的：研究低氧状态HIF．1cc基因干扰对NB4急性早幼粒细胞的增殖、侵润和分化等生物学行为影响，探索HIF．1a对急性早幼粒白血病细胞分化的相关机制。方法：设计及合成HIF．1a特异性siRNA，构建HIF．1asiRNA重组慢病毒和阴性对照组慢病毒，通过感染筛选出最佳慢病毒载体。CoCl2模拟缺氧

5、微环境，检测不同浓度梯度对NB4细胞增殖的影响，选择最利于NB4细胞生长的CoCl2浓度，作为模拟缺氧微环境的终浓度。利用最佳慢病毒载体干扰NB4细胞中HIF．1a的表达，RT-PCR检测HIF．1a的mRNA表达水平和Westernblot检测细胞内HIF。la蛋白、VEGF蛋白、SDF一1蛋白的干扰效果，用新型四唑单钠盐试剂盒(CCK．8)检测实验组和对照组的细胞存活率，用AnnexinV-PE细胞凋亡检测试剂盒检测HIF．1a干扰下实验组和对照组细胞凋亡水平变化，使用流式细胞术检测实验组和对照组细胞CDllb的表达以分析NB4的成熟分化程度，探索HIF．1a对急性早幼粒白血病细胞分

6、化的相关机制。TT万方数据浙江大学硕士学位论文中文摘要结果：1、模拟缺氧微环境，CoCh终浓度在100肛mol／L时，细胞增殖效率、HIF．1aRNA表达水平显著性高于常氧条件培养NB4细胞(尸<0．05)，对NB4细胞影响作用最强。2、MOI为25、50、75时，GFP表达率均值为50．6％、75．3％、98．2％，三组MOI存在显著性差异(P<0．01)，因此选择MOI为75是较合理的选择。3、流式细胞术检测感染细胞上GFP表达强度，评估慢病毒干扰细胞株NB4转染效率，与阴性慢病毒比较，慢病毒4对于NB4细胞的荧光感染效率最低(尸

7、且彼此间无显著性差异(尸<0．05)；RT．PCR检测各组感染细胞中HIF．1etRNA表达情况，与阴性对照相比，慢病毒2感染NB4细胞HIF．10【表达率最低(尸<0．01)，慢病毒2载体干扰NB4细胞可作为实验组。4、与阴性对照组相比，实验组细胞增殖率、HIF．10【mRNA抑制率均下降，有显著性差异(P