人参皂苷对成纤维细胞衰老的拮抗作用

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1、人参皂苷对成纤维细胞衰老的拮抗作用张敬敬龚琳周鹏刘佳（通讯作者）（湖南长沙医学院基础医学院410219）【摘要】目的：研宄人参皂苷对小鼠成纤维细胞生长和衰老的影响。方法:自新牛.昆明小鼠身上分离培养成纤维细胞，加入不同浓度的人参皂苷，观察细胞生长曲线，MTT法分析细胞活力。结果：中浓度人参皂苷可以在传代后6-12d显著增加活细胞。结论：一定浓度的人参皂苷可以延迟细胞进入袞老和死亡状态。【关键词】人参皂苷；成纤维细胞；衰老；生长【中图分类号】R285.5【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）07-0041-03AntagonisticeffectofGinsenosid

2、eonfibroblastsenescenceZhangJingjing,GongLin,ZhouPeng^iuJia.BasicMedicalCollegeofChangshaMedicalCollege^u&rsquojnanProvinceChangsha410219,China［Abstract］Objective:Studiesinmicefibroblastgrowthginsenosidesandtheeffectsofaging.Methods:Sincethenewkunmingmicefibroblastcultivation,addingdifferentconce

3、ntrationsofginsengsaponin,observethecellgrowthcurve,cellvitalitydeterminedbyMTTmethod.Results:Concentrationofginsengsaponincanbeinbatchesafter6tol2dasignificantincreaseinlivingcells.Conclusions:Acertainconcentrationofginsengsaponincandelaycellsintoaginganddeath.【Keywords】Ginsengsaponin;Fibroblast

4、s;Aging;Growth从古至今，中药人参备受推崇，被誉为“中药之王”。近年来研宄者们确认了人参具有抑制中枢疲劳、抗肿瘤、抗辐射等作用［1］。木课题组通过前期动物实验，己经证实了人参皂苷在一定程度上具有抗衰老作用［2］。人参皂苷抗生物老化是否与直接影响细胞有关，木课题侧重于探索人参皂苷对小獄成纤维细胞生长和袞老的影响。1.材料与方法1.1材料1.1.1动物SPF级昆明小鼠，体重（22±2）g，雄性小鼠10只和雌性小鼠20只，由湖南斯莱克景达实验动物奋限公司提供，批号43004700008689,长沙医学院湖南省重点建设学科标准动物室饲养。雄雌小鼠按1:2合笼，常规饲养。

5、1.1.2主要试剂及仪器人参皂背（宏久生物科技公司）、DMEM培养液（Hyclone公司）、胎牛血清（四季青公司）、0.25%胰蛋白酶（Sigma公司），其他试剂为分析纯。倒置显微镜（德国MOTIC）、细胞培养箱（Thermo公司）、低速离心机（Beckman公司）。1.2方法1.2.1乳鼠成纤维细胞分离与培养取出生12h以内的乳鼠，处死后75%酒精浸泡消毒后，取其背部皮肤洒精浸泡消毒，以无Ca2+Mg2+PBS漂洗皮肤，将皮肤剪成lmm2大小均匀平贴于培养瓶中，瓶底朝上倒置5min后翻转，加DEME完全培养基37°C、5%CO2条件下充湿培养，24h后再加入足量的培养基继续培养，每2天

6、换1次培养液，1周后将组织块去除。传代培养则根据细胞自身生长速度，融合达60%-70%时用胰蛋白酶消化，镜下观察细胞冋缩成近圆形时终止消化，以1:2比例传代培养，约开始为3-4d传一代，逐渐延长为5-9d传一代。1.2.2细胞处理待细胞第8次传代，细胞用DMEM洗一次后，加入含有人参皂苻的DMEM和10%胎牛血清，高、中、低三个浓度组人参皂苷的最终浓度分别为100、10、lmg/dl,未加人参皂苷的细胞为空白对照，连续培养至15代。1.2.3细胞生长曲线取第15代成纤维细胞，以（10×105）/ml的细胞密度接种于24孔板，继续加入人参皂苷培养，每个浓度均置6个平行孔，用台盼

7、蓝把染法，每2d将各浓度的1孔以胰蛋白酶消化脱落下来后计存活细胞数，共计12d,以所获活细胞数绘制细胞生长曲线。1.2.4MTT实验取第15代各组成纤维细胞，以（10×105）/ml的细胞密度接种于96孔板，每组设12平行孔。5%CO2、37°C充湿培养72h，离心去上清，每孔加入MTT至终浓度为0.5mg/ml，作用4h后每孔各加入100μIDMSO充分振荡，用酶标仪检测570nm波长处的吸光度（A）值，计算相对