快速培养法应用和荧光定量pcr检测肺炎支原体

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1、快速培养法应用和荧光定量PCR检测肺炎支原体【摘要】目的：探讨肺炎支原体快速培养法及荧光定量PCR在支原体感染早期快速诊断中的价值。方法：对我院呼吸内科及儿科216例疑似肺炎支原体感染的初诊患者同时进行肺炎支原体快速培养法和荧光定量PCR检测，并结合临床诊断及咽拭子真菌培养结果分析两种方法的临床应用价值。结果：216例患者咽拭子肺炎支原体快速培养阳性率为17.2%,荧光定量PCR法检出肺炎支原体阳性率为15.3%，两种方法检测肺炎支原体感染率无明显差异（P>0.05）；儿童与成人肺炎支原体感染率无明显差异（P>0.05）。结论:荧

2、光定量PCR方法特异性强，敏感性高，早期诊断意义较大，但是需要贵重仪器设备且操作复杂，其缺点不太适合一般实验室广泛推广。快速培养法具有方便、简单、准确，且可以用于早期检测等优点，尤其适用于不易静脉血抽的新生儿和危重病人，但要排除真菌引起的假阳性，同时临床需提高对成人肺炎支原体感染的重视。【关键词】肺炎支原体；快速培养法；焚光定量PCR肺炎支原体（Mycoplasmapneumonia,MP）是介于细菌与病毒之间的一种病原体微生物。在已发现的8种类型对动物致病的支原体中，只有肺炎支原体肯定对人致病。MP是儿童及成人呼吸道感染的主要病

3、原体之一，是社区获得性肺炎的重要病原［1］。MP主要引起呼吸系统疾病，由口、鼻分泌物经空气传播，常为散发，也有小流行，自20世纪90年代以来，MP感染有逐年增多的趋势。据文献报道中国MP感染率在流行高峰期可迗33%〜35%［2］，国外可高达50%。主要见于儿童和青少年，也可见于成人，秋冬季较多。除直接导致呼吸道感染（咽炎、支气管炎及肺炎）外，MP尚可通过血行播散或免疫途径引起脑炎、肾炎及心肌炎等多种肺外并发症，严重威胁患者身体健康。因此，儿童及成人呼吸道感染时检测MP，对临床诊断和治疗均具有非常重要的意义。本研究对2011年12月

4、至2012年12月泸州医学院附属医院就诊患者同时进行快速培养法及荧光定量PCR法检测，现将结果报道如下。1资料与方法1.1一般资料收集我院2011年12月至2012年12月期间住院部就诊患者的咽拭子标本，其中男119例，女97例，儿童113例，成人103例。1.2试剂与仪器肺炎支原体快速鉴定培养基由郑州安绿科生物工程有限公司提供；PCR试剂由迖安基因有限公司提供，PCR仪器为ABI7500fast荧光定量PCR仪。1.3方法用无菌生理盐水浸过的棉拭子直接擦拭咽后壁，每位患者采集三个咽拭子标本。一份咽拭子作肺炎支原体快速培养：用加样

5、枪取lOOul无菌培养基液加入阴性对照孔，将采集到的咽拭子标本置于培养基瓶内搅动数次，取出已挤尽液体的棉拭子弃之，再用加样枪取该培养液lOOul分别加于每孔（阳性孔和药敏孔），并每孔滴加液体石蜡一滴后盖上盖，置于37°C恒温箱中培养24-48h观察结果，培养液由桔红色变成黄色为阳性，培养液保持桔红色不变为阴性。一份咽拭子用于PCR检测，检测时严格按说明书操作。另一份标本做咽拭子真菌培养。快速培养和PCR结果出来后立即与临床诊断进行比较。1.4统计分析用SPSS10.0软件进行统计分析，计数资料以百分比表示，用卡方检验，比较用t检验

6、，P〉0.05为无显著性差异。2结果2.1216例疑似MP感染患者，咽拭子肺炎支原体快速培养阳性37例（阳性率17.2%）,荧光定量PCR技术阳性33例（阳性率15.3%），如以PCR法为“金标准”，快速培养方法的敏感性、特异性、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）分别为86.5%（32/37）、99.4%（178/179）、97.0%（32/33）、97.3%（178/183）。两种方法检测肺炎支原体感染阳性率比较无显著性差异（P>0.05），见表1。216例患者中被确诊为MP感染者41例，快速培养法与荧光定量PCR法的临

7、床符合率分别为94.6%和93.9%。2.2在113例儿童中被确诊为MP感染22例（阳性率19.5%），103例成人中被确诊为MP感染19例（18.4%）。两个年龄阶段MP感染阳性率无显著性差异（P〉0.05），见表2。3讨论肺炎支原体是造成呼吸道感染的主要病原体，目前检测MP的主要诊断方法包括分离培养、血清学和分子生物学方法。分离培养法是MP鉴定的金标准，MP快速培养法操作简便价格低廉，对实验室条件要求不高，且咽拭子采集标本无创伤性，为MP感染的早期诊断提供了一个有效的方法。MP抗体检测法是常用的血清学方法，其最佳检测时间为临床

8、症状出现后7〜10d（窗口期），抗体10〜30d迖高峰，12〜16周又转阴，故12周后血清MP-IgM多为阴性［3］。虽然MP-IgM抗体特异性高，但一些免疫缺陷或免疫系统尚未发育完善的患儿不能对病原体产生正常的免疫应答，在MP感染的情况下也不能产