人STAT3重组腺病毒的制备及其对胃癌细胞株SGC-7901增殖影响.doc

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1、人STAT3重组腺病毒的制备及其对胃癌细胞株SGC-7901增殖影响董宗明1赵永亮1余佩武1SupportedbytheNaturalScienceFoundationofChina(81071980),Correspondingauther:YuPeiwu,Tel:86-023-68754161.E-mail：yupeiwu01@vip.sina.com[基金项目]国家自然科学基金资助项目（81071980）[通讯作者]余佩武，电话：023-68754161，E-mail：yupeiwu01@vip.sina.com黄钢2（400038重庆，第三军医大学：西南医院全军普通外科中心1；基

2、础部医学遗传教研室2）[摘要]：目的：制备可表达人转录因子STAT3的重组腺病毒，检测该基因在胃癌细胞株SGC-7901表达活性及对其增殖影响，为探讨STAT3信号通路在胃癌免疫抑制发生中的作用机制打下实验基础。方法：以人胎盘组织cDNAs为模板通过PCR获得hSTAT3完整阅读框，T/A克隆测序证实后，亚克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV中，PmeI线性化与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在BJ5183细菌同源重组，经PacI线性化后转染293FT细胞包装，同时包装空载体腺病毒，进行病毒滴度测定。取AdV-STAT3、AdV-GFP分别感染SGC-7901细胞，设空白对照，West

3、ern-blot检测三组细胞STAT3蛋白表达，MTT法检测对细胞增殖的影响。结果：获得hSTAT3完整阅读框，T载体中测序无突变，亚克隆至pAdTrack-CMV，并与pAdEasy-1成功重组后包装AdV-STAT3，测定滴度为2.8×1010pfu/ml，AdV-GFP滴度为3.2×1010pfu/ml。与AdV-GFP组及空白对照组比，Western-blot示AdV-STAT3组蛋白明显表达，差异有统计学意义（P＜0.01），MTT示，AdV-1-STAT3组明显促进细胞增殖，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：首次成功制备hSTAT3的重组腺病毒，感染胃癌细胞株SGC-7

4、901后高表达并促进其增殖，为进一步研究Jak2-STAT3信号通路与胃癌之间的关系奠定基础。[关键词]：STAT3；重组腺病毒，胃癌，增殖ConstructionofhumanSTAT3recombinantadenovirusvectoranditseffectionongastriccancercelllineSGC-7901DONGZongming1ZHAOYongliang1YuPeiwu1*HUANGang2(1DepartmentofGeneralSurgery,SouthwestHospital,2DepartmentofMedicalGenetics,ThirdMili

5、taryMedicalUniversity,Chongqing40038,China)Abstract:TheaimofthisstudyistopreparerecombinantadenovirusvectorcontaininghumanSTAT3(signaltransducerandactivatorofthetranscription3),thenexaminingitsexpressinGastriccelllineSGC-7901anditseffectonproliferationofSGC-7901,tolaythefoundationforthefurtherres

6、earchoftherelationbetweenSTAT3’ssignalandthemechanismoftheimmunosuppressioningastriccancer.Methods:FirstthecompletelyhSTAT3codesequencewasabtainedbyPCRusingthecDNAsofplacentafromhealthyvolunteer’sasthetemplate,nextcloneintopTA2Tvectorandsequenced,thentheSTAT3codewassubclonedintotheshuttleplasmido

7、fpAdTrack-CMVafterdigesting.ThelinearizedproductofpAd-Track-CMV-STATwastranferedintoBJ5183escherichiacoli,tohomologousrecombinationwithpAdeasy-1vector.TherecombinedadenovirusDNAtransfectedinto293FTforpackagingandamplif