[医学]杨燕军实验3离体蛙心灌流

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1、生理学实验课程杨燕军752253－666（O）13983921142（M）yang712100@yahoo.com.cn实验三电刺激及化学因素对心脏活动的影响实验三电刺激及化学因素对心脏活动的影响实验目的:实验原理:实验对象:蟾蜍器材和药品:实验步骤:1.制备离体蛙心:2.仪器连接:记录正常曲线期前收缩和代偿间歇(单刺激,1V)0.65%NaCl置换任氏液1%CaCl21~2滴3%乳酸1~2滴0.01%Adr1~2滴0.01%Ach1~2滴82%CaCl25~6滴注意事项:观察项目:下次实验:膈神经放电实验目的3.观察Na+、K+、Ca2+、Adr、Ach对心脏活

2、动的影响，理解内环境理化因素相对恒定对维持心脏正常活动的重要性。1.学习离体蛙心灌流方法。2.观察在心脏活动的不同时期给予刺激所引起的期前收缩和代偿间歇。实验原理心肌具有4个特性:兴奋性、自律性、传导性和收缩性有效不应期=收缩期+舒张早期期前收缩:在正常节律性兴奋到达之前，在心脏舒张的中期后，给心脏一个额外有效刺激，可引起一个提前出现的收缩。Na+、K+、Ca2+、Adr、Ach对心脏活动的影响实验原理代偿间歇:当正常起搏点的兴奋到达心脏时，常常落在期前收缩的有效不应期中，因而不能引起心肌的兴奋与收缩，使期前收缩后出现一个较长时间的间歇期。心肌细胞动作电位心肌收缩

3、曲线超常期相对不应期有效不应期生物机能实验系统(RM6240)，张力换能器1，刺激电极1，蛙类手术器械一套，铁支架1，双凹夹2，蛙心套管1，蛙心夹1，烧杯2，滴管2实验器材：任氏液、0.65%NaCl、1%CaCl2、1%KCl、0.01%Ａch0.01%Adr2%CaCl2、药品：制备离体蛙心1.捣毁脑和脊髓，暴露心脏1231234心室动脉圆锥左心房右心房左主动脉右主动脉右心房左心房心室静脉窦2.蛙心插管1234仪器连接1234描记正常蛙心收缩曲线曲线疏密：代表心跳频率。曲线的规律性：代表心室的节律性。曲线的顶点水平：代表心室收缩的程度。曲线的基线：代表心室舒张

4、的程度。期前收缩和代偿间歇吸出插管内全部任氏液，置换等量0.65%NaCl，观察心缩曲线变化，待效应明显后，吸出灌流液，用新鲜任氏液换洗3次，直至心缩曲线恢复正常。置换等量0.65%NaCl灌流液中无Ca2+进入细胞内Ca2+胞浆内Ca2+心肌收缩力心肌的兴奋-收缩耦联加入1~2滴1%CaCl2于新换入的任氏液中，观察心缩曲线的变化。待出现效应后，用新鲜任氏液换洗3次至曲线恢复正常。细胞外Ca2+Ca2+内流Ca2+与肌钙蛋白的结合心肌收缩力但舒张不完全,收缩基线上移加1滴3%乳酸细胞外H+↑H+内流H+和Ca2+离子竞争性结合肌钙蛋白的结合位点抑制Ca2+离子与

5、肌钙蛋白结合心肌收缩力↓心率加入1~2滴0.01%Adr于任氏液中，待效应出现后，用任氏液换洗至曲线恢复正常。Adr与心肌受体（β1）结合心率心肌收缩力慢通道Ca2+通透性4期自动去极速度慢反应细胞，0期Ca2+内流AP上升速度和幅度房室交界兴奋传导复极相K+外流复极过程加速平台期进入细胞内Ca2+房室交界慢反应细胞AP幅度最大复极电位负值增加，离阈电位距离加入1-2滴0.01%Ach于任氏液中，待效应出现后，用任氏液换洗至曲线恢复正常。Ach与M受体结合抑制钙通道，Ca2+内流膜对K+的通透性AP2、3期缩短，Ca2+内流心肌收缩力心率舒张期自动去极速度兴奋传导

6、速度减慢加入5~6滴2%CaCl2于新换入的任氏液中，观察心缩曲线的变化。待出现效应后，用新鲜任氏液换洗3次至曲线恢复正常。细胞外Ca2+Ca2+内流Ca2+与肌钙蛋白的结合心肌收缩力但舒张不完全,收缩基线上移当细胞内Ca2+时Ca2+与肌钙蛋白得不到解离心肌持续收缩,停止于收缩状态钙僵注意事项制备标本时，应按指导试探着插管，避免损伤心脏(包括静脉窦)。每次换液时，插管内的液面均应保持恒定高度。本实验所用药品种类较多，吸任氏液的吸管、吸心插管内溶液的吸管和各种药物的吸管要分开，不可混淆，互相污染，以免影响结果。药物作用不明显时，可加量。随时滴加任氏液于心脏表面使之

7、湿润。固定换能器时应稍向下倾斜，以免自心脏滴下的水流入换能器内造成短路。部分结果分析0.65%NaCl，心跳减弱心肌收缩活动有Ca2+触发，心肌肌浆网不发达，因此其收缩强弱依赖于细胞外Ca2+浓度灌流液中缺乏Ca2+，心肌细胞内Ca2+大大减少，心肌兴奋--收缩藕联过程减弱，心肌收缩活动减弱高K+任氏液，心跳明显减弱甚至停跳于舒张状态部分结果分析K+与Ca2+有竞争性拮抗作用。细胞外K+浓度增加可抑制细胞膜对Ca2+的转运，从而使进入胞内的Ca2+减少，心肌兴奋--收缩藕联过程减弱，心缩力降低甚至停于舒张状态。高Ca2+，心缩加强，舒张不完全，甚至停于收缩状态部分

8、结果分析心