【医学ppt课件】离体蛙心灌流

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1、实验内容离体蛙心灌流实验目的学习离体蛙心灌流的方法观察Na+、K+、Ca2+以及肾上腺素、心得安等对离体心脏活动的影响实验原理心脏的活动具有自动节律性。动物的心脏离体后，用理化特性类似于其血浆的替代液（任氏液）灌流后，在一定的时间内，仍能有节律的收缩和舒张，改变灌流液的成分，则可引起心脏活动的改变。实验原理心脏受交感神经和迷走神经的支配。交感神经兴奋时，其末梢释放递质---去甲肾上腺素（NA），作用于心肌细胞上的β受体，使心肌收缩力增强；迷走神经兴奋时，其末梢释放递质—乙酰胆碱（Ach），作用于心肌细胞膜上的M受体，对心肌细胞起抑制作用，使心肌的自律性降低

2、。用受体阻断剂（心得安）阻断受体，则相应的递质不能发挥作用。实验用品蛙心套管、常用手术器械、蛙心夹、蛙板、棉线、毁髓针、任氏液、滴管、烧杯、5%NaCl、2%CaC12、1%KCl、0.01%心得安、0.01%肾上腺素、计算机和机械-电换能器、铁支架、双凹夹。蟾蜍或蛙,实验动物方法与步骤一.离体蛙心的制备（斯氏蛙心插管法）取一只个体较大的蟾蜍，用毁髓针双毁脊髓和脑，仰卧固定于蛙板上；暴露心脏：左手持镊提起胸骨后端的皮肤，右手持剪将皮肤剪一小口，然后将剪刀由开口处伸入皮下，朝向两侧下颌角方向剪开皮肤，并将皮肤掀向头端。用镊子提起胸骨后方的腹肌，在腹肌上剪一小

3、口,将粗剪刀紧贴胸壁伸入胸腔(避免损伤下面的心脏和血管)，沿皮肤切口方向剪开肌肉，剪断左右乌喙骨和锁骨，使创口成一个倒三角形。左手持眼科镊，小心提起心包膜，右手用眼科剪剪开心包膜,将心包膜剥离,使心脏完全暴露。用眼科剪小心剪去左右主动脉干周围的心包膜和系膜。在左主动脉下穿一线,距动脉圆锥5mm处结扎。再在左、右两主动脉干下穿一线，打一活节备用。左手提起左动脉干上的结扎线，右手用眼科剪在动脉圆锥前端沿向心方向剪一斜口，将少量任氏液加入斯氏蛙心套管中，立即用右手食指堵塞住套管上口，然后将套管尖端由左主动脉上的剪口插入动脉圆锥。当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将

4、套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥部后方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内，不可插入太深,以免插破心室壁或心室堵住套管下口。此时可见套管中液面随心脏搏动而上下移动。用滴管吸去套管中的血液，补充新鲜的任氏液，如此反复几次，使任氏液完全替代血液,若套管插入心室未见液面上下移动,则可能是凝血小块堵塞了套管下口。提起备用线,将左主动脉连同插入的套管扎紧,再将结扎线固定在套管的小钩上。剪断结扎线上方的血管,轻轻提起套管和心脏,在心脏的下方绕一线，将左右肺静脉及前后腔静脉一起结扎(注意切勿损坏静脉窦),于结扎线下方剪去所有牵连的组织,将心脏摘出。保持套管内液面恒定高度

5、,即灌流液充满套管三分之一，即可进行实验。二.连接实验装置：离体蛙心制备好后，将套管固定在铁支架上，用带线蛙心夹夹住少许心尖肌肉，蛙心夹上的系线连至张力换能器的着力点上，注意不要过度牵拉心脏。然后将张力换能器连在计算机上。三.开机实验系统实验项目循环实验蛙心灌流观察项目向套管内加入任氏液，作好正常标记，观察正常的心搏曲线。向套管内加入2—4滴5%的NaCL溶液，立即用专门滴管轻轻混匀，同时作好加药标记，观察心搏曲线的频率振幅变化。向套管内加入1—2滴2%的CaC12溶液，立即用专门滴管轻轻混匀，同时作好加药标记，观察心搏曲线的频率振幅变化。观察项目向套管内

6、加入1—2滴1%KCL溶液，同上所述，混匀、标记、描记并观察心搏曲线。向套管内加入1—2滴0.01%肾上腺素溶液，同上所述，混匀、标记、描记并观察心搏曲线。向套管内加入1—2滴0.01%心得安溶液，描记并观察心搏曲线变化。然后加入与前一步等量的肾上腺素溶液，描记并观察心搏曲线变化。以上每步当曲线出现明显变化时，立即吸去套管内的灌流液，用新鲜的任氏液换洗几次，同时作好换洗记号。使灌洗液面保持原高度。等待心搏恢复正常。然后做下一观察项目。注意事项分离血管时，应尽量去净心包膜。每次换液时，液面均应保持恒定的高度，即灌流液充满套管三分之一。每次加药应用专门的滴管，

7、并逐滴加入，用滴管轻轻混匀，使之迅速发挥作用，若作用不明显再逐滴补加。随时滴加任氏液于心脏表面使之保持湿润状态。每次加药出现明显效应后，应立即换洗灌流液数次，待心跳恢复正常后，再进行下一步骤。实验顺序可以根据心搏情况临时改变，如心搏变慢变弱时，可先加入肾上腺素或Ca2+。离体蛙心灌流实验装置蛙心套管支架换能器蛙心计算机