离体蛙心灌流【机能实验指导】

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1、离体蛙心灌流［实验目的］1.学习离体蛙心灌流的实验方法。2.观察Na、K、Ca三种离子及肾上腺索、乙酰胆碱等因索对心脏活动的影响。［实验原理］1.心脏的正常节律性活动需要一个适宜的内环境，内环境的变化宜接影响着心脏的正常活动。本实验在蛙心的灌流液内人为地加入一些物质而改变心脏活动的内坏境，观察心脏活动有何变化。2.心肌细胞分类收缩性兴奋性传导性自律性非自律细胞，心房肌，心室肌细胞有有有无自律细胞,p细胞,浦肯野细胞无有有有快反应细胞：心房肌，心室肌，浦肯野细胞：主耍由快钠通道被激活，Na快速内流引发动作电位，去极速度快慢反应细胞：窦房结细胞，房室交界区细胞：主耍由慢钙通

2、道被激活，Ca内流引发动作电位，去极速度慢3.心肌细胞的生理特征：电生理特征：自律性，兴奋性，传导性机械主理特征：收缩性影响心肌细胞电牛理因素彩响心肌细胞兴奋性因素（心室肌细胞）影响心肌细胞自律性因索（窦房结细胞）影响心肌细胞传导性因素（房室交界区细胞）静息电位水平与阈电位水平之间的差距4期自动除极的速度结构因素：直径钠通道状态最人复极电位水平与阈电位水平之间差距动作电位0期去极速度和幅度邻近部位膜的兴奋性心肌细胞兴奋一收缩耦联过程所需的Ca要从细胞外液转运，细胞兴奋时，膜通道开放，因此：细胞外液Ca浓度f一一细胞兴奋时内流Cat心肌收缩力f反之亦然4.1%KCI：即1

3、34mmol/L（正常：4mmol/L）轻，屮度高钊I细胞外KT一一K与Ca在细胞膜上有竞争性抑制一一K抑制细胞膜对Ca转运一一进入细胞内Caj一一心肌的兴奋收缩联过程减弱一一心肌收缩力J[K]T一一膜内外k浓度梯度减小一一静息电位绝对值减小一一兴奋性f[K]T一一细胞膜对k通透性增加一一K通道失活VJ—一自动去极化VJ—一自律性J[K]T一一细胞膜对k通透性增加一一K外流增加一一最人复极电位f一一自律性J[K]T一一Ca内流受抑制一一0期去极速度和幅度降低一一传导性降低重度高钾：[K]门一一RP1一一Na通道失活一一兴奋性丧失1.2%CaCI2：即180mmol/L（

4、正常：2mmol/L）细胞膜外Na与Ca有竞争性抑制细胞外液Ca浓度匸一一细胞兴奋时内流Cat心肌收缩力T快反应细胞：高ca一一Na内流抑制一一0期去极化速度及幅度卜•降一一传导性J慢反应细胞：高Ca一一Ca易进入细胞，Ca内流增加一一0期去极化速度增加一一传导性f2.0.65%NaCI:111mmol/L细胞外Caj—一2期内流Ca

5、一一胞浆Ca浓度J匕、肌收缩J[Ca]J—一Ca内流减少一一0期去极化速度减慢一一传导性！[Ca]J—一Ca不易进入细胞一一4期自动除极的速度减慢一一自律性J7：肾上腺索正性变化肾上腺素与心肌细胞膜上的P1受体结合卜肌细胞和肌浆网膜Ca通

6、透性f一一肌浆屮Ca浓度增加2肌收缩f使K通道，Na通道，Ca通道都开放，•…一慢Ca通道一&乙酰胆•碱负性变化乙酰胆碱与心肌细胞膜上的M受体结合匕、肌细胞膜K通道的通透性f一一促k外流一1:窦房结细胞复极时K外流f一一最人复极电位水平f一一自律性J2：复极时K外流f一一AP2,3期缩短一一Ca进入细胞内J匕、肌收缩J乙酰胆碱可直接抑制Ca通道一一Ca内流JC?肌收缩J[实验对象]青蛙或蟾赊[实验器材和药品]1•器材牛物信号采集系统、机械换能器、蛙类手术器械1套、蛙心插管、蛙心夹、试管夹、双凹夹、万能支架、滴管、150ml小烧杯4个、任氏液。2.药品0.65%氯化钠、2

7、%氯化钙、1%氯化钾、1：10000肾上腺索、1：10000乙酰胆碱等。［实验步骤］1离体蛙心的制备(1)取1只蟾赊，破坏脑和脊髓，仰卧固定于蛙板上，丿IJ外科剪由剑突处向两锁骨肩峰端呈三角形剪开皮肤，用粗剪刀剪开胸壁，用图钉固定两前肢，用锻了提起心包膜，用眼科剪将具剪开，眾露心脏。(2)在两个主动脉干下各穿两根细线(一根用来结扎腔静脉，另一根用来结扎蛙心插管和主动脉)，并将具小一根打一活结备用。(3)将心脏上翻，辨认心房，静脉窦，腔静脉，然后结扎腔静脉。(4)川左手捉起结扎线，右手卅眼科剪在左侧主动脉距分义部3mm处剪一“v”型口。将盛有少量任氏液的蛙心套管(用拘指将

8、套管堵住，以防套管中的任氏液流岀)从“v”型口插入动脉球底部，然后稍后撤套管，再将蛙心管尖端转向蟾赊的背侧及左下方，于心缩期插入心室内。插管如已进入心室，可见管屮液而随着心搏而升降，此时即可将预置线的活结扎紧，并固定于插管壁的小钩上。(5)小心提起套管和心脏，剪断主动脉左右分支；将心脏连同静脉窦一起剪下。(6)吸去管内的血液，并用任氏液反复冲洗心室内的余血，以防血液凝固而影响实验的进行。用连有细线的蛙心夹在心舒期夹住心尖部。(心尖人，夹纟R织少，不易损伤心脏)2.实验装置将蛙心插管用试管夹固定于支架上，蛙心夹的连线连接在机械换能器上。换能