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《运动对高脂饮食性肥胖大鼠棕色脂肪组织线粒体形态和动力学的影响及可能机制的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、运动对高脂饮食性肥胖大鼠棕色脂肪组织线粒体形态和动力学的影响及可能机制的研究摘要：目的：探讨有氧运动对高脂饮食性肥胖大鼠脂肪线粒体形态和动力学的影响，并对其可能的机制进行探讨。方法：将三周龄SD健康雄性大鼠随机分为正常组和高脂饮食组，后者在第8周时选取体重超出正常对照组平均体重20%的大鼠为肥胖大鼠，再分为肥胖对照组、运动干预组,第16周时处死。采用透射电镜观察脂肪细胞的线粒体形态,采用荧光定量PCR技术检测脂肪细胞中NYGGF4基因的表达水平，采用Westernblot方法检测Mfnl蛋白、Mfn2蛋白、Drpl蛋白的表达水平。结果：1）肥胖组大鼠脂肪细胞线粒体体积变
2、小、数量明显减少，线粒体靖断裂、减少、消失，部分线粒体肿胀，甚至呈空泡状；有氧运动干预后，肥胖组大鼠脂肪线粒体形态基本正常，与正常组接近，表现为线粒体靖清晰可见，线粒体无明显肿胀、皱缩。2）肥胖组大鼠脂肪细胞NYGGF4mRNA、Mfnl蛋白表达水平均显著高于对照组；Mfn2、Drpl蛋白表达水平与对照组比较差异均无统计学意义；有氧运动干预后，肥胖组大鼠脂肪细胞NYGGF4mRNA、Mfnl蛋白表达水平均显著降低，与对照组相比差异无统计学意义。结论：NYGGF4基因可能通过上调Mfnl蛋白表达水平,导致肥胖大鼠脂肪细胞线粒体形态发生变化、数量减少，影响细胞线粒体形态及动
3、力学。关键词：运动；肥胖；线粒体；形态；动力学；机制中图分类号：G804.7文献标识码：A文章编号：1006-2076(2013)01-0070-04近年来，随着经济的发展，人们的生活水平不断的提高,饮食结构生活习惯发生了很大的改变，肥胖症呈现增多的趋势，肥胖及其发病机制的研究也受到广泛关注［1-2］。棕色脂肪与能量平衡有关，棕色脂肪具有产热功能，对维持能量平衡具有重要作用。研究发现，肥胖大鼠棕色脂肪组织明显减少，且棕色脂肪组织细胞存在线粒体损伤、能量代谢异常［3］。研究表明，有氧运动能够有效地控制脂肪的合成，增加脂肪的供能，促进脂肪的消耗［4］。本研究通过观察有氧运动
4、干预前后肥胖大鼠棕色脂肪组织线粒体形态变化，探讨导致肥胖大鼠棕色脂肪组织线粒体形态以及动力学变化的可能机制。1材料与方法1.1实验动物与分组将34只3周龄SD健康雄性大鼠随机分为2组：正常组8只，断乳后给予普通饲料喂养，在第8周时选取体重超出正常对照组平均体重为20%的大鼠16只，再随机分为肥胖对照组、运动干预组，其中肥胖对照组继续给予高脂饲料喂养，运动干预组给以普通饲料喂养的同时，每天采用无负重游泳运动1h,每周5天。所有大鼠均在实验第16周时处死。普通饲料构成为常规配方。高脂肪饲料配方如下：每100克普通饲料中加入全脂奶粉15g,猪油5g,黄肚豆15g,鸡蛋黄50g
5、,鱼肝油10滴，牛胆酸纳0.5g[3]o大鼠自由饮食摄食，自然昼夜采光。1.2样本的采集隔夜禁食后将大鼠称重（BW）,麻醉，断头处死，迅速取肩胛间区棕色脂肪组织（BAT）,睾周白色脂肪组织（WAT）,称重后，用锐利眼科剪将棕色脂肪组织标本剪成2mmX2mmX2mm左右的脂肪组织方块，依次用40°C的2.5%的戊二醛专用电镜固定液固定，0.1mol/LPBS缓冲液洗涤2次，1%餓酸后固定30〜60min,常规电镜样品制备程序脱水、渗透、包埋、超薄切片、铀铅染色，电镜观察线粒体形态及超微结构；留取部分脂肪组织于-8（TC冰箱保存,进行NYGGF4mRNA和Mfnl、Mfn2
6、及Drpl蛋白表达的测定。1.3NYGGF4mRNA的表达采用Trizol一步法提取细胞总RNA,经凝胶电泳显示28S、18S清晰条带2条，测定0D260/0D280比值〉1.8。经反转录反应后采用荧光定量RT-PCR法检测棕色脂肪细胞中NYGGF4mRNA表达水平。从NCBI的nucleotide中查得目的基因和内参照基因，联系上海博亚生物技术有限公司设计上下游引物。引物序列如下：NGGF4上游序列:5'CCTGTCAGACCCCACTTTC3',NGGF4下游序列：5'CAGCCCACTGTTTTCCAAAT3；p-actin上游序列：5'TCACCCACACTGT
7、GGCCATGTAGGA33-actin下游序列：5'CAGGGGAACCGGTCATTGCCAATGG3'。退火温度均为55.4摄氏度。采用CT法计算NYGGF4mRNA相对表达量。目的基因mRNA相对表达量=2CT（参考基因）-CT（目的基因）。1.4Westernblot检测蛋白表达应用Westernblot技术测Mfnl、Mfn2及Drpl蛋白的表达。各取100mg棕色脂肪组织剪碎并于玻璃匀浆器充分匀浆，加3〜5倍体积的组织裂解液于冰盒中吹打30min,49下12OOOrpm离心10min,取上清液。BCA蛋白定量试剂盒检测蛋白
