热疗联合５氟尿嘧啶影响胃癌mkn４５细胞的体外抑制、凋亡的研究

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1、热疗联合5氟尿卩密噪影响胃癌MKN45细胞的体外抑制、凋亡的研究张祎1杨卫东1于惠玲2通讯作者1・河北保定市第二医院河北保定071000;2•河北大学附属医院河北保定071000【摘要】目的观察5氟尿卩密噪(5—Fu)温热化疗对人胃癌MKN45细胞的体外抑制、凋亡的效果•方法根据预实验确定工作浓度•实验四组.MTT法检测细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞术和逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)观察细胞凋亡及对survivin和Bel-2表达变化•结果热化疗组对MKN45细胞抑制、促凋亡作用最明显;热化疗组Bel—2与survivin下调最显著.survivin与Bel—2蛋口的表达呈正相关

2、性，细胞凋亡率与两种蛋口表达负相关•结论热化疗能增加对MKN45细胞的抑制及凋亡作用，可能与下调Bel—2和survivin的表达有关.【关键词】热化疗；5氟尿卩密唳；胃癌；凋亡；Bel-2;survivinTheinhibitiveeffectandapoptosisofGastriccarcinomacelllineMKN45withhyperthermiaand5—FuinvitroZHANGYI(MedicalOncology’secondHospitalofhebeibaoding,HeGbeiProvinee,071000)[Abstract]Objective:Toobse

3、rvetheinhibitiveeffect，apoptosisofMKN45cellswith5Fuandhyperthermia•Methods:MTTassaydeterminetheworkingconcentration•ThecellGsweredividedintofourgroups.FCMandRT—PCRdeterminetheapoptosisrates’Bcl—2andsurvivinexpression.Results:5—Futhermo—chemotherapyshowedinhibitiveeffect>downregulateexpressionofth

4、em.Thecorrelationbetweenthemispositive,apoptosisandprotionexpressionisnegative.Conclusion:5—Futhermo—chemotherapyinhibitcell)ncreasestheapopGtosis’t【Khreoyuwgohrtdhse]down—regulationofthem-5—Fu;thermo—chemotherapy;gastriccarcinomaA;bcl—2;survivinChineseLibraryClassification:R735.2R730.58Documentc

5、ode:A【中图分类号】R735・2【文献标识码】A【文章编号】1008—6315（2015）12—0391—01导言近3O年来，胃癌的发病率和病死率均居首位•恶性肿瘤的发展,是由于细胞的无限增殖、凋亡障碍所致•热化疗能明显诱导细胞的凋口1］.survivin和Bel—2是主要凋亡抑制分子•该实验通过观察热化疗诱导胃癌细胞凋亡，研究二者作用机制，为临床治疗提供实验依据・1材料和方法1・1药品与试剂5氟尿喀呢;四氮甲卩坐蓝;兔抗人survivin^Bcl-2单克隆抗体洋抗兔FITC-

6、gG,RT-PCR试剂盒;引物.1・2细胞培养细胞接种于RPMI1640培养液中，37°C恒温,5%CO2

7、环境中培养,对数生长期细胞进行实验.1.3细胞的分组与处理对照组细胞37°C常规培养;化疗组加入5一FU;热疗组43°C水浴加温60min（温度波动幅度≤±0・2°C）;温热化疗组方法同上.1・4MTT法确定测定细胞增殖抑制率将细胞以5×104个??mL-1密度接种于96孔培养板.24h后加药和（或）加温,继续培养后加MTT,加二甲基亚飒，用全自动酶标仪测OD值，细胞增殖抑制率=（对照组OD均值—实验组OD均值）/对照组OD均值×100%（公式一）.1.5凋亡率的测定收集各处理组细胞，以凋亡指数计算凋亡率於1=［细胞总数一（G0/G1+S+G2

8、/M洛时相细胞数］/细胞总数×l00%（公式二）1.6测定Bel—2,survivin的蛋片表达取1ml单细胞悬液，分别加入100μl兔抗人survivin和Bel—2抗体和FITC—IgG二抗测蛋白表达量以均道值表示.1・7RT-PCR检测基因表达提取细胞总RNA.Bcl-2上游引物5′-GAACGTAAGGGTATGAAGGA一3′下游引物5′-CACTGGGTAAGACTA