Biotnt microRNA CDNA 第一链合成试剂盒.doc

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1、目录号：CL—（120T）microRNAqRT-PCRSybgreenDetectionKitwww.biotnt.com上海冠泰生物技术有限公司上海市闵行区罗锦路98号2号楼502室Tel:021-51692391E-mail:lab@biotnt.comContentsandStorage（组分及贮存）货号试剂说明120T储存条件CL--A15×逆转录Buffer1支-20度（可以稳定至少一年）CL--A2高效逆转录酶50ul/支1支-20度（可以稳定至少一年）CL--A3重组RNA酶抑制剂35ul/支1支-20度（可以稳定至少一年）CL--A

2、4dNTPmix120ul/支1支-20度（可以稳定至少一年）CL--A5dd水（Rnase和Dnasefree）1.25ml/支3支-20度（可以稳定至少一年）CL--A6特异性茎环逆转录引物（10×）120ul/支1支-20度（可以稳定至少一年）CL-BBiotnt荧光染料PCRPremix1.25ml/支3支-20度（可以稳定至少一年）CL--C1realtimePCR上游引物（10×）720ul/支1支-20度（可以稳定至少一年）CL--C2realtimePCR下游引物（10×）720ul/支1支-20度（可以稳定至少一年）合计13支Int

3、roduction（简介）产品简介：IDaccession序列ProductNameMicroRNA，MicroRNAs（miRNAs）是一种小的内源性非编码RNA分子，大约由21－25个核苷酸组成。这些小的miRNA通常靶向一个或多个mRNA，通过翻译水平的抑制或断裂靶标mRNAs而调节基因的表达。成熟的microRNA的形成包含多个步骤。首先，microRNA基因被转录成命名为pri-microRNA的初级转录物；动物pri-microRNA的第一次剪切位于细胞核内，产生大小为70个核苷酸左右并能形成茎-环结构的microRNA前体，称为pre-

4、microRNA；第二次剪切位于细胞质中，pre-microRNA被剪切成21-25个核苷酸成熟的microRNA。图１，pre-microRNA和microRNA示意图试剂盒系统简介：microRNAqRT-PCRSybgreenDetectionKit包括了三部分，PartA为RNA进行逆转录的所有成分，包括一种全新高效逆转录酶、反应缓冲液及该实验中必需的反应组分；使用该试剂盒能够以microRNA为模板,通过茎环引物合成microRNA的cDNA第一链，可以用于120个RNA进行逆转录合成CDNA；PartB为realtimePCR的染料Pre

5、mix，该premix经过优化，可以适合以microRNA为模板转录的CDNA进行的realtimePCR实验；PartB提供了充足的Premix，可用于CDNA进行360次realtimePCR实验；PartC为realtimePCR的特异性上下游引物，以及可以用做质控的阳性CDNA模板；另试剂盒中提供一支RNA酶，DNA酶free的双蒸水，可用于360次体系的配制。注意：本试剂盒用于成熟的microRNA的逆转录。提供的组分足够用于120次特异性CDNA的逆转录和360次realtimePCR实验。警告：本产品仅供科研使用，请勿用于医药、临床治疗

6、、食品及化妆品等其他用途。安全提示：本产品中部分试剂有腐蚀性或毒性，请勿直接接触皮肤或吞咽；操作时请穿戴实验服、防护镜和手套；如果接触皮肤，应立即用洗涤剂和大量清水冲洗；误食或其他危急情况，请及时到医院就治；部分试剂易燃，请注意消防安全。Methods（方法）其他需要自己准备的：1．仪器：混匀器，PCR仪，离心机（冷冻）；移液器（10μL，200μL，1000μL）；冰盒；2．耗材：1.5mLEppendorf管（无菌、无酶、RNase-free；货号A2010B0X04）Tips(RNase-free)（1000μL、200μL的枪头；货号A201

7、0B0X09）；3．DEPCddH2O（Biotnt统一货号A2010B0X01）：也可以自己配制。配法如下：配1000ml的DEPC处理水，超纯水1000ml，加1ml100％DEPC，磁力搅拌器搅拌过夜。第二天高压蒸汽灭菌121度，25minDEPC分解成二氧化碳和酒精，封闭冷藏备用。最好分装小瓶来用，尽量避免污染；4．手套，口罩。试剂盒使用注意事项：1．用于cDNA合成反应的溶液试剂尽可能用DEPC进行处理，并在高压灭菌后使用，有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理；2．RNA样品要避免基因组DNA

8、污染；3．避免多次反复冻融RNA；4．试剂盒的各组成成分应在-20℃保存；5．cDNA产物应置于-20℃保存