优化酶提取贯叶连翘药材活性成分工艺

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1、优化酶提取贯叶连翘药材活性成分工艺郝鹏飞1，卫冰2，刘富岗3，杨云1*（河南中医学院药学院，郑州450008）摘要目的探讨贯叶连翘中金丝桃素的酶提取法的最优酶及其最佳工艺。方法以高效液相色谱法测定金丝桃素含量为指标，在纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、复合酶SPE-007A中筛选出最优两种酶，继考察这两种酶复合后的浸提倍数、加酶量、pH值、温度、酶解时间等因素对提取工艺的影响，并用正交试验优选提取条件，从而得到最佳工艺。结果最优酶为纤维素酶与果胶酶复合酶，pH4.8、酶用量（纤维素酶/果胶酶）2.0%/2.0%、温度50℃、酶解时间6h、酶解液浸提倍数15倍。结论该工艺高效、稳

2、定，可用于今后对贯叶连翘的研究。关键词贯叶连翘；金丝桃素；酶提取；复合酶OptimizeEnzymeExtractionCraftsActiveComponentsofHypericumperforatumL.Abstract：ObjectiveChoosethebestenzymeandcraftconditionsofHypericinfromHypericumperforatumL..MethodsThecontentofHypericinbyHPLCwasusedbeanindex.ChoosetwoofthebestenzymesinCellulase,Pectinase,X

3、ylanase,Glucanase,β-GlucanaseandEnzyme(SPE-007A).Theninvestigatetheeffectontheircomplexbysolid-liquidratio,enzymedosage,pH,temperatureandtheextractiontime.Selecttheoptimalcraftconditionsbytheorthogonalexperiments.ResultsThetwobestenzymesareCellulaseandPectinase,theoptimumextractionprocessisasfol

4、lows:PH4.8,enzymedosageCellulase-Pectinase:2.0%-2.0%,temperature50℃,extractiontime6h.ConclusionThismethodisefficientandstable.ItcouldbeusedintothefutureresearchofHypericumperforatumL.KEYWORDS：HypericumperforatumL.;Hypericin;enzymeextraction;compoundenzyme贯叶连翘（HypericumPerforatumL.）是藤黄科金丝桃属多年生草本植

5、物[1]。含有多种化学成分，主要有苯并二蒽酮类，间苯三酚类，黄酮类，单宁类等[2]。近年来，由于在治疗抑郁症方面疗效确切[3],同时具有抗AIDS等方面作用,所以其开发应用在国际上受到广泛关注。其中，金丝桃素被认为是贯叶连翘提取物中最具有生物活性的物质，具有抗病毒、抗抑郁等作用。国内外已完成了金丝桃素抗爱滋病的Ⅱ期临床试验，治疗恶性神经胶质瘤的临床研究也在进行之中[4]。国际市场上规定贯叶连翘提取物中金丝桃素的含量不能低于0.3％[5]，但由于贯叶连翘中金丝桃素的含量非常低，以目前常用的高浓度乙醇提取工艺很难取得较高的经济效益、科研价值[6]。鉴于此，本研究拟通过现代生物技术与传统提取

6、技术相结合的方法，考察几种不同酶对贯叶连翘药材中金丝桃素的提取效果，筛选出对药材酶解效果较好的酶或酶的复合物，并对筛选出的酶进行其工艺的优化，以此工艺制备金丝桃素，以期获得良好的效果。1仪器与试药LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津）；LC-20AT紫外-可见检测器（日本岛津）；BS210S型电子天平（北京赛多利斯公司）；METTLERAE240电子分析天平（瑞士）；微型植物试样粉碎机（河北省黄骅市新兴电器厂）等。6本研究所用贯叶连翘药材购自陕西渭南，经河南中医学院药学院董诚明教授鉴定为藤黄科金丝桃属植物贯叶连翘的地上部分。金丝桃素对照品（购于？？？批号？？）；纤维素酶、果胶酶、木聚

7、糖酶、β-葡聚糖酶、复合酶SPE-007A（夏盛实业集团有限公司）；甲醇为色谱纯（天津四友精细化学品有限公司）；双蒸水；其余所用试剂均为分析纯。2方法与结果2.1金丝桃素的含量测定2.1.1对照品溶液的制备取金丝桃素对照品1.04mg，精密称定，以甲醇溶解定容至5mL，得0.208g·L-1的金丝桃素对照品甲醇母液。精密吸取对照品母液0.5mL，加甲醇定容至10mL，得0.0104g·L-1的金丝桃素对照品溶液2.1.2样品溶液的制备取贯叶连翘