医学毕业论文纯甘油-4℃保存方法对羊膜活性影响的研究

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1、纯甘油-4QC保存方法对羊膜活性影响的研宄姓名：2014年6月25日纯甘油-4°C保存方法对羊膜活性影响的研究作者：张军崔巍高伟牧荣【摘要】目的：观察-4°C纯甘油保存方法对羊膜活性的影响。方法：取健康剖宫产产妇胎盘，剥离羊膜，分成2cmx2cm小块，保存于-4°C纯甘汕中，3,7，14,30,60,90d后，分别进行光镜，酶组织化学［乳酸脱氢酶（LDH）、琥珀酸脱氢酶（SDH）］及免疫组织化学［碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）］观察，并于新鲜羊膜对比。结果：光镜下，-4"C纯甘油保存60d以内羊膜上皮层结构较完整，可见少数细胞破裂。胞核脱失。90d组上皮层结构破坏明显，多数细胞破裂

2、，核脱失。酶组织化学（LDH、SDH）及免疫组织化学（bFGF）显示：60d内各组于新鲜羊膜比较无显著差异性；各组间两两比较亦无显著性差异（P0.05）。而90d组于新鲜对照组及各实验组间两两比较均有显著性差异（P0.05）。结论：羊膜在-4°C纯甘油保存60d内；组织结构；上皮细胞活性稳定。【关键词】羊膜活性保存Effectofpreservationinglycerolat-4°ConamnioticmembranevitalityAbstractAIM:Toinvestigatethevitalityofamnioticmembranepreservedinglycerolat-

3、4°CMETHODS:Freshamnioticmembrane（AM）attachedtohealthyplacentaswastakenandpreservedinglycerolat-4°C.After3,7,14,30,60,90d,theepithelialstructure（lightmicroscope）andtheenzymeactivity（SDHandLDH）ofAMwasanalyzedbyimmunohistochemicalmethodcombiningwithimageanalysissystemtoinvestigatethechangesoftheexp

4、ressionofbasicfibroblastgrowthfactor（bFGF）inAM.RESULTS:MostoftheepithelialcellsofAMpreservedinglycerolat-4°Cremainedintactafter60d.ThevitalityofAMhadastablelevel.CONCLUSION:ThevitalityofAMpreservedat-4°Cglyceroldecreasedwithtime.After60-dpreservation,thevitalityofAMdecreasedsignificantly.Therefo

5、reoperatorscanselecthigh-levelAMtotreatocularsurfacediseases.•KEYWORDS:amnioticmembrane;vitality;preservation0引言1995年Tseng［l］利用保存羊膜移植重建眼表获得成功。羊膜移植治疗眼表疾病己成为国内外眼科学者关注的热点。然而0前的研究多集中于羊膜移植的临床效果和作用机制。有关羊膜保存方法及其对羊膜活性影响的报道甚少。我们应用光镜，酶组织化学及免疫组织化学方法，探讨-4"C纯卄油保存方法对羊膜活性的影响，明确羊膜的有效保存时间。1材料和方法1.1材料取HBsAg、衣原体、人

6、免疫缺陷病毒及梅毒均为阴性的健康孕妇剖宫产所获得的胎盘，在无菌条件下将胎盘用无菌生理盐水冲洗干净。置于含青霉素50mg/L、链霉素50mg/L、新霉素100mg/L、二性霉素B2.5mg/L的生理盐水中浸泡lOmin，钝性剥离羊膜，使其与绒毛膜分离。将羊膜平铺于粘贴手术巾的纸片上，羊膜的粗糙面与纸的粗糙面相贴，羊膜上皮面朝上［2,3］。然后将附有羊膜的纸片剪成2.5Cmx2.5cm方形小块，放入无菌纯卄油3mL的小瓶巾，并置于-4°C冰箱中保存。bFGF兔抗人抗体，北京中山生物制品有限公司提供。S-P试剂盒，北京屮山生物工程有限公司提供。纯甘油（上海运佳黄浦制药有限公司提供，分析纯级）

7、。1.2方法40g/L中性甲醛阎定，石蜡包埋后连续切片8张（4张免疫组化应用），厚约4pn,HE染色后光镜观察。将羊膜制成厚约8

8、im的冰冻切片，每个样本切8张，每种酶4张（其屮一张为阴性对照），行乳酸脱氢酶（LDH）、虢珀酸脱氢酶（SDH）组织化学染色。应用图象分析系统（V1DS-21软件），随机测定8个高倍镜视野中羊膜上皮层光密度平均值。免疫组织化学染色（ABC法）:石蜡切片脱蜡至水，自来水冲洗2〜3min;双蒸水2次x2min。滴加bFG