医学毕业论文二十碳五烯酸对人肝癌hepg2凋亡细胞线粒体的影响

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1、二十碳五烯酸对人肝癌HepG2凋亡细胞线粒体的影响姓名：2014年6月25日二十碳五烯酸对人肝癌HepG2凋亡细胞线粒体的影响【关键词】二十碳五婦酸；HepG2细胞；细胞凋亡；线粒体EffectsofeicosapentaenoicacidonapoptosisandmitochondriainHepG2cells【Abstract】AIM:ToinvestigatethemitochondriachangesinhumanhepatoblastomaG2(HcpG2)cellapoptosisinducedbyeicosape

2、ntaenoicacid(EPA).METHODS:IntheHepG2cellsincubatedwithEPAinvitro，cellapoptosiswasdetectedbyDNALadder，thechangesofmitochondriafunctionandquantityweredeterminedwithmethylthiazolyltetrazolium(MTT)colorimetricassayandfluorescenceprobe.TheexpressionandactivityofCaspase9we

3、remeasuredinHepG2cellapoptosiswithWesternblottingandspecialsubstrate.RESULTS:Twentyfourhoursafterexposureto120gmol/LEPA，HepG2cellsdisplayedtheapoptosisbytheDNAladderpattern;thenumberofthemitochondriawasdecreased;theAvaluebytheMTTtestwas0.173士0.065,whichindicatedthatt

4、hefunctionofmitochondriawassignificantlydeclined(P0.01);comparedwiththeuntreatedHepG2cells，theexpressionofCaspase9wasupregulatedandtheactivityofCaspase9wasincreasedto75.4土4.8inHepG2cellstreatedwithEPA(P0.01).CONCLUSION:ThechangesofmitochondriamayplayagreatroleintheHe

5、pG2cellapoptosisinducedbyEPA.【Keywords】eicosapentaenoicacid;HcpG2cells;apoptosis;mitochondria【摘要】0的：探讨二十碳五烯酸（EPA）诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其对线粒体的影响.方法：HepG2细胞与经EPA处理后，DNALadder检测细胞凋亡的发生，应用线粒体荧光探针和四唑盐（MTT）比色法分析细胞线粒体数量和功能，应用免疫印迹法和特异性底物检测HcpG2细胞Caspasc9蛋白酶的表达和活性.结果：终浓度为120pmol/LEP

6、A处理HepG2细胞24h后，可以检测到凋亡标志性的DNA梯形带；细胞线粒体数量减少，MTT比色法检测A值为0.173=t0.065(P0.01)，提示线粒体功能降低；线粒体相关凋亡级联反成的启动分子Caspase9蛋白表达增加，Caspase9酶活性增强至75.4士4.8，与未经EPA处理HepG2细胞相比差异有统计学意义(P0.01).结论：EPA可能通过损伤线粒体诱导人肝癌HcpG2细胞凋亡.【关键词】二十碳五烯酸；HepG2细胞；细胞凋亡；线粒体二十碳五條酸(eicosapentaenoicacid,EPA)駡于n3多不

7、饱和脂肪酸(n3polyunsaturatedfattyacid，n3PUFA)，主要存在于深海鱼汕中，是一类对人体有益的重要营养素.近來的研究表明I13PUFA可以抑制肿瘤细胞增殖，具有一定的抗瘤功效[1]，苏中诱导肿瘤细胞凋亡可能是主要机制之一[2].有研究发现，EPA可以通过p53依赖，Fas介导途径诱导人肝癌HepG2细胞凋亡[3].我们采用DNA梯形带检测，MTT比色法和激光扫描共聚焦显微镜检测等方法，通过观察EPA对体外培养的HcpG2细胞凋亡和线粒体的影响，初步探讨线粒体损伤在EPA诱导HepG2细胞凋亡过程屮所发

8、挥的作用，为进一步研究n3PUFA在抗肿瘤方面的功效提供-定的理论基础.1材料和方法1.1材料人肝癌HepG2细胞购自屮国科学院上海生化与细胞所；DMEM培养基购自美国Gibco公司；EPA，四唑盐(MTT)购自美国Sigma公司；线粒体焚光探针MitoTrac