资源描述：
《医学毕业论文苯丁酸钠体外对人肝癌细胞hepg2增殖和凋亡的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、苯丁酸钠体外对人肝癌细胞殖和凋亡的影响姓名，2014年6月25日苯丁酸钠体外对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响作者：孟玫，王春亭，蒋进皎，张继承，姜军梅【摘要】［0的］探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(PB)体外对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。［方法］不同浓度苯丁酸钠处理HepG2,应用MTT比色法观察苯丁酸钠对HepG2的生长抑制作用，落射荧光敁微镜、DNA电泳和流式细胞仪观察HepG2的调亡，Westernblot检测苯丁酸钠处理前后HepG2细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达水平的变化。［
2、结果］苯丁酸钠2mmol/L、4mmol/L、8mmol/L作用48h对细胞的抑制率分别为19.41%、39.03%、42.19%,作用72h对细胞的抑制率分别为27.42%、57.11%、70.31%,并诱导细胞凋亡；4mmol/L苯丁酸钠作用HepG248h细胞凋亡率明显高于对照组。落射荧光显微镜和DNA电泳均观察到苯丁酸钠作用后HepG2细胞出现凋亡细胞的特征性变化。苯丁酸钠处理HepG2ASBcl-2蛋白表达减少，Bax蛋白表达塘加。［结论］苯丁酸钠体外抑制HepG2增殖并促进其凋亡，其作用机制可能
3、是通过降低细胞内的Bcl-2蛋白，增加细胞内Bax蛋白而实现的。【关键词】肝肿瘤近年來越來越多的研究资料表明组蛋白去乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(PB)对白血病、淋巴瘤以及多种实体瘤具有诱导分化和治疗作用［1〜4］，同吋作为一种诱导分化恶性肿瘤的新药，苯丁酸钠具有广谱、高效、低毒的特性［5］。我们在实验屮观察了苯丁酸钠对人肝癌细胞HepG2的作用，探讨苯丁酸钠对HepG2增殖和凋亡的影响及其机制。1材料与方法1.1细胞培养HepG2细胞购Q山东省医学科学院细胞室。培养基为含10%胎卞血清的RPMI1640（Gib
4、co公司产品），置于37°C5%CO2的孵箱内培养。48h传代，0.25%的胰酶、0.02%EDTA（乙二胺四乙酸二钠）消化。取对数生长期的细胞进行实验。1.2药物苯丁酸钠购自ALEXIS,用RPMI1640培奍基溶解为20mmol/L浓度备用。1.3四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色实验将HepG2细胞悬液浓度调整为5xl04/ml，每孔200（il接种于96孔板，实验组分别加入不同浓度的苯丁酸钠，对照组不加药，另设空白对照孔（只加培养基，无细胞），每组设三个平行重复孔。继续培养，分别在48h、72h各取三孔加
5、入MTT（5mg/ml）20^1,放置孵箱内4h后弃上清加入10%的SDS（十二烷基磺酸钠）200
6、il，过夜。震荡15min,用全
7、lj动酶标仪（DenleyDrangonWellscanMK2）检测570nm处的吸光度值（A值）。抑制率（％）=（A对照-A实验）/（A对照-A空白）xlOO%。1.4荧光染色观察细胞凋亡常规收集对照组、苯丁酸钠处理组细胞，4"CPBS洗涤2次。加入荧光染料Hoechst33342（Anaspec产品）至终浓度为2.5pg/ml,37°C避光孵育染色30min,取细胞悬液滴
8、于清洁的载玻片，盖上盖玻片，落射荧光显微镜（JEOL-1200EX型）下观察细胞。1.5流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡对数生长期的细胞用无血清的RPMI1640培养24h同步化后，分组干预48ho收集不同处理组细胞，4°CPBS洗涤2次，计数，调整细胞浓度为1><106个/ml,取100
9、il细胞悬液与含1%RNA酶的Tis-HCl缓冲液混匀共M孵育lOmin,加入碘化丙陡(PI)和异硫氰/酸焚光素(flucresceinisothiocyanate，FITC)标itl的磷脂酰结合蛋O(AnnexinV)
10、各5(J混匀，避光37°C孵育30min,FCMCFACScan美WBD公司产品)检测，凋亡细胞AnnexinV-FITC(+)PI(-),正常活细胞AnnexinV-FITC(-)PI(-),坏死细胞AnnexinV-FITC(+)PI(+),利用CellQuest功能软件进行参数获取和数据分析。1.6DNA电泳收集对照组，苯丁酸钠处理组细胞各5x107,4'CPBS洗涤2次，采用常规的蛋白酶K消化，酚/氯仿抽提和乙醇沉淀法。提取出的DNA用2%的琼脂糖凝胶电泳，沒化乙啶漿色AlphalmagerTM22
11、00数字电泳凝胶成像系统成像分析。1.7Western印记法检测Bcl-2、Bax表达蛋白收集约5x107的细胞，PBS洗涤2次，细胞裂解液(50mMTris-HClpH7.5,150mMNaCl,lg/LSDS,lmMDTT,10ml/LNp-40,lOg/L脱氧)贝酸钠，25mg/L亮抑素，25mg/L胰蛋0酶抑制剂，ImMPMSF)提取细胞总蛋白。蛋白定量采用BCA法。调节每份样品浓度，加入等体积2xSDS
