兰花dna的优化提取开题报告

《兰花dna的优化提取开题报告》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、兰花DNA的优化提取i.立题依据l.i论文题目及研究领域1.1.1论文题目：兰花DNA的优化提取1.1.2研究领域L在分子遗传的应用1.2论文研究的理论意义及应用价值兰花一般是指兰科植物(Orchlidaceae)，它包括五个品种春兰(Cymbidiumgoe-ring)、蕙兰(Cymbidium)、寒兰(CyambidumMakion)、墨兰(Cymbidiumsinense)建兰(Censifoli-um)它是鲜花植物屮最大科之一，全世界约有800多属，25000多种，分布于世界各地，大多数种类分布于东南亚、澳大利亚、中南美洲、非洲和马

2、达加斯加。我国的野生兰科植物约冇173属，1240多种，在南北各地均有分布，但以云南、台湾、海南最为丰富。因而鉴别起来比较W难，而现在采用分子标记进行兰花品种鉴别是一种比较有效的方法，而进行分子标记实验时，DNA的浓度和纯度的耍求都是相当严格的。1.3目前研究的概况和发展趋势迄今为止，国内外报道的植物DNA提取方法多达好几十种，如十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法'十二烷基磺酸钠(SDS^S［l］，高盐低pH法'碱裂解法［3］，Zigenhagen法［'］，脲法［6］，DraperandScott法［9］，Csclgradient法［7］，

3、CTAB/Csclgradient^#5」，苯酌法U1DNAzoipeagent法CTAB(十六焼基三甲基漠化饺)方法和SDS(十二烷基磺酸钠)方法是目前最常用的两种［9］,它们都是一种强去污剂。CTAB具有从低离子强度的溶液屮沉淀核酸和酸性多聚糖的特性，在这种条件下，蛋0质和中性多聚糖仍留在溶液里，在高离子强度的溶液里，CTAB与蛋tl质和除大多数酸性多聚糖以外的多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸，因此，CTAB可以用丁•从大量产生粘性多糖的植物制备纯化DNA［13j。而SDS可使细胞膜及核膜破裂，因此被用来分离DNAlll］。该分离过

4、程的第一步是用热的去污剂(SDS)进行抽提物置于0°C并加入高摩尔浓度的乙酸钾，离心去除不溶物，以去除蛋白质和多糖等杂质。2.论文研究的内容2.1论文重点解决的问题2.2论文拟开展的几个大方1:12.2.1SDS方法和CTAB方法提取2.2.2实验结果分析2.2.3结果讨论2.3论文拟得出的主要结论选择出兰花的优化提取方法(SDS方法或CTAB方法)3.论文拟采用的研究方法3.1拟采用的主要研究方法用SDS和CTAB方法提取兰花DNA,并进行比较，通过实验结果来选择兰花的优化提取方法。3.1.1实验材料都江瑕1U丙川花外山场购炙的材料兰花拈

5、春兰(Cymbidiumgoe_ring)、蕙兰(Cymbidium)、寒兰(CyambidumMakion)>墨兰(Cymbidiumsinense)。3.1.2实验仪器天平、研体和研棒、恒温水浴锅、冰盒、泠冻离心机、冰箱、微量离心移液器、微量离心机、50ml离心管等。3.1.3实验试剂液氮、TBE缓冲液、异丙醇、1XCTAB缓冲液、氯仿/异戊醇(24:l)、0.2mol/ml乙酸纳、5XTBE缓冲液等。3.1.4实验方法3.1.4.1IXCTAB法提取兰花DNA(1)将2g新鲜兰花叶片用液氮速冻，然后在研体中将其磨碎，在化冻之前将粉末转

6、移至50ml聚丙烯离心管中，然后加入20ml预热至90度的1XCTAB提取一离心管屮提取缓冲液。轻轻转动离心管，混匀，然后置于65°C水浴放置40分钟。(2)浞合物泠至室温后加入等体积的氯仿/异戊醇。轻轻颠倒离心管几次使管内混合物构成乳状液。室温5000转/分钟离心10分钟分相。(3)将上清液(水相)转移至一干净离心管中，37°C保温30分钟。(4)加入0.7体积的异丙醇，仔细混匀，室温放置15分钟沉淀DNA。(5)用一玻璃钩将DNA钩出，并转移至一装有50ml70%乙醇，0.2mol/L乙酸钠的干净离心管屮，冰上放置20分钟，然后转移至一

7、装有5ml70%乙醇的离心管中，冰上旋转5分钟。(6)将DNA转移至一干浄离心管中，空气干燥10分钟，溶于尽可能少的TE缓冲液(可多达5ml。视DNA的量和纯度而定),4°C保存3.1.4.2SDS法提取兰花DNA(1)将2克新鲜兰花的叶片置于液氮中速冻，然后在研体中将其麽碎，将泠冻粉未转移至50ml离心管中加入15ml提取缓冲液。轻轻旋转混匀。(2)加入lml20%SDS,混匀，65°C保温10分钟，并不时轻旋转混匀。(3)加入5ml5mol/L乙酸钾，混匀后冰上放置20—30分钟。用14000r/min度离心25分钟。上清波用纱布过滤，

8、转移至一干净的50ml离心管巾，加入10ml异丙醇，轻轻颠倒浞匀，一20°C放置40分钟沉淀核酸。(4)然后,在4°C条件下，以2000r/min进行离心,离心20分钟,去上清液